Hipoksi indüklenebilir faktör-1α aktivite Biyoparlaklık görüntüleme, bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli intrakranial tümör hipoksi gelişimini izlemek için uygulanır.
Bu tümör hipoksi malign ilerlemesini teşvik ve terapötik yanıt olumsuz etkileyen önemli bir rol oynadığı kabul edilmektedir. Bu, derin yerleşimli ortotopik tümörlerin izlemek için verimli bir anlamı olmaması nedeniyle, kötü huylu beyin tümörleri intrakraniyal gelişimi sırasında in vivo, tümör hipoksi in situ hakkında az bilgi vardır. Lusiferaz gen ifade canlı hücreler tarafından yayılan ışık algılama dayalı Biyoparlaklık görüntüleme (BLI), preklinik hayvan çalışmalarında tedaviye yanıt olarak tümör büyüme ya da tümör boyutu değişiklikleri değerlendirmek için, hızla, özellikle, kanser araştırmaları için kabul edilmiştir. Ayrıca, bir muhabir gen promotor dizisinde kontrol altında ifade ederek, belirli bir gen ekspresyonu BLI tarafından non-invaziv takip edilebilir. Hipoksik stres altında, sinyal yanıtları ağırlıklı olarak hipoksi indüklenebilir faktör 1α (HIF-1α) aracılığıyla çeşitli genlerin transkripsiyon sürücü. Bu nedenle, stably insan meme kanseri MDA-MB231 hücreleri (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc) in vitro HIF-1α biyoparlaklık tahlil yapılır transfekte HIF-1α muhabiri inşa 5HRE-ODD-luc, normoxia hücrelerin (% 21 O 2) bir kontrol olarak hizmet ederken, BLI 24 saat önce hipoksik odası (% 0.1 O 2) transfekte hücreler kuluçka. Hipoksi altında hücreler için gözlenen anlamlı olarak daha yüksek foton akısı, organizatörü normoxia içinde olanlara oranla bir artış HIF-1α bağlanma (HRE elemanları), göstermektedir. Hücreler bir meme kanseri beyin metastazı modeli kurmak için doğrudan fare beyninin içine enjekte edilir, in vivo tümör hipoksi dinamikleri biyoparlaklık görüntüleme implantasyon sonrası 2 hafta başlatılan ve haftada bir kez tekrarlanır . BLI artmış intrakraniyal tümör hipoksi gösteren, beyin tümör ilerledikçe artan ışık sinyalleri ortaya koymaktadır. Histolojik ve immünhistokimyasal çalışmalar in vivo görüntüleme sonuçları onaylamak için kullanılır. Burada, in vitro HIF-1α biyoparlaklık tahlil, intrakranial tümör hipoksi izlemek için in vivo biyoparlaklık görüntülemede bir çıplak fare ve uygulama bir meme kanseri beyin metastazı cerrahi kurulması yaklaşımları tanıtacak.
Meme kanseri, beyin metastazı Evre IV meme kanseri hastalarının% 30'unda ortaya çıkar. Yüksek morbidite ve mortalite ile ilişkili ve medyan sağkalım 13 ay 6 sahiptir. , Intrakranial başlangıcında ve ilerlemesinde gibi patofizyolojik profilleri anlaşılmasını kolaylaştırmak için bu klinik yıkıcı hastalığı taklit etmek için uygun hayvan modelleri için bir ihtiyaç vardır. Burada, insan meme kanseri hücreleri, fare beyninin içine doğrudan enjekte edilerek ortotopik meme kanseri …
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışmada, DOD Meme Kanseri IDEA Ödülü kısmen desteklenen W81XWH-08-1-0583 ve NIH / NCI CA141348-01A1 (DZ) ve FAMRI klinik bilim adamı ödülü (DS). Görüntüleme altyapı U24 CA126608 ve Simmons Kanser Merkezi (P30 CA142543) ve NIH 1S10RR024757-01 tarafından kısmen desteklenen Uluslararası Küçük Hayvan Görüntüleme Araştırma Programı tarafından sağlanmaktadır.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
D-luciferin | Gold Biotechnology | L-123 | 120 mg/kg in PBS in a total volume of 80 μl for in vivo study |
Isoflurane | Baxter International Inc. | 1001936060 | |
Matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
Hamilton syringe | Hamilton Company | 1701 | |
32G Hamilton needle | Hamilton Company | 7803-04 | |
Hypoxia chamber | Billups-Rothenberg, Inc. | MIC-101 | |
Bioluminescence imaging system | Caliper Life Sciences | IVIS Spectrum system | |
G418 | Fisher scientific | SV3006901 |