이 연구는 전송 전자 현미경과 부정적인 착색 방법에 대한 전자 지원 식물 샘플 준비의 조합을 사용하여 절반 정도 하루에 식물 바이러스 질병의 신속하고 명확한 진단을 할 수있는 방법을 설명합니다.
바이러스에 의해 유도 ultrastructural 변화 조사는 종종 명확 식물 바이러스 질병을 식별 할 수 필요합니다. 전송 전자 현미경 (TEM)에 대한 기존의 샘플 준비 등 조사가 며칠 1,2 걸릴 수 있으므로 식물 바이러스 질환의 급속한 진단에 적합하지 않습니다. 전자 고정이 대폭 통상 샘플 준비 3-5 후 관찰과 유사한 ultrastructural 결과와 TEM 조사를위한 샘플 준비 시간을 단축 할 수 있습니다. 여러 가지 맞춤 제작 전자 장치는 성공적으로 고정 및 TEM 조사 5-8에 대한 생물학적 시료의 삽입을 위해 사용할 수있는 현재 사용할 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 담배 모자이크 바이러스에 설명 (TMV)는 T에 대한 전자 지원 샘플 준비를 사용하여 절반 정도 하루에 잎의 ultrastructural 변경을 진단하는 것이 가능하다는 것을 Nicotiana tabacum의 식물을 감염EM. 그 많은 단계를 수동으로 6-8을 수행해야하므로 더 많은 시간과 노동력이 소요있는 다른 사용 가능한 장치에 대조적으로 거의 완벽하게 자동으로 5 샘플 준비를 수행으로 우리는 상업적으로 이용 가능한 전자 장치와 본 연구를 수행하도록 선택했습니다. 샘플 준비가 나머지 TMV에 감염된 잎과 ultrastructure 및 크기의 다음 시험의 수액에서 바이러스 입자의 완전 자동으로 부정적인 염색법을 수행으로 고정하고 삽입하는 동안 수행 할 수 있습니다.
TEM에 대한 전자 지원 식물 샘플 준비는 몇 시간 3,4,16 내에 신속하고 신뢰할 수있는 ultrastructural 데이터를 제공하기 위해 입증되었습니다. 본 연구에 사용 된 방법으로 달성 세포 소기관과 멤브레인의 미세 구조 보존 샘플 고정의 대규모 감소의 장점과 5,15 기존과 cryofixed 샘플과 비슷했고 약 2 시간에 3 일 이상에서 시간을 삽입. 이것은 문학에서 현재 TEM에 대한 가장 빠른 샘플 준비 프로토콜을 나타냅니다. 본 연구에서 설명하는 방법은 TMV 유발 ultrastructural 변경 및 바이러스 에이전트 자체의 명확하고 신속한 식별 할 수 부정적인 염색 방법과 TEM에 대한 전자 지원 식물 샘플 준비를 결합. TMV 유도 ultrastructural 변경은 전송 elec에 고정의 시작 후 약 4 시간 이내에, 트리밍 sectioning 및 사후 착색 한 후에 조사 할 수TRON 현미경. 완전히 자동으로 표본 준비 모드를 사용하면 바이러스 대리인의 크기와 폭을 결정하기 위해 중간에 제외 착색을 수행 할 연구원을 해제. 따라서, 우리는이 방법은 공장 phytopathology의 농업과 과학 실험 향후 사용하기 위해 매우 중요하다 절반 정도 하루에 식물 바이러스 질환의 명확하고 신속한 진단을 할 수 있다는 결론을 내릴 수 있습니다. 이 방법은 또한 동물과 인간의 질병의 급속한 진단을 위해 사용될 수로 의료 및 수의학 병리의 미래 응용 프로그램에 대한 큰 가능성이 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 오스트리아 과학 기금 (FWF, P20619 및 BZ에 P22988)에 의해 지원되었다.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Glutaraldehyde | Agar Scientific Ltd. | R1312 | |
Osmium tetroxide | Agar Scientific Ltd. | R1022 | |
Agar 100 resin | Agar Scientific Ltd. | R1043 | |
Dodecenyl succinic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1051 | |
Methyl nadic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1081 | |
Benzyl dimethylamine | Agar Scientific Ltd. | R1060 | |
Lead citrate | Agar Scientific Ltd. | R1210 | |
Uranyl acetate | Agar Scientific Ltd. | R1260A | |
Phosphotungstic acid | Agar Scientific Ltd. | R1213 | |
Formvar | Agar Scientific Ltd. | R1202 | |
Leica EM AMW | Leica Microsystems | ||
Leica (Reichert) Ultratrim | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Leica (Reichert) Ultracut S | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Diatome Ultra 45 | Gröpl | ||
Philips CM10 TEM | FEI (formerly Philips) | Newer model is available | |
Cell D | Olympus Inc. | ||
Optimas 6.5.1 | Media Cybernetics Inc. | Newer version is available |