这项研究描述了使用微波设备样品制备透射电子显微镜和负染色方法相结合的方法,允许快速和清晰的大约半天的植物病毒病的诊断。
由病毒引起的超微结构变化往往是必要的,清楚地识别植物病毒病的调查。与传统的样品制备透射电子显微镜(TEM),这样的调查需要数天时间,1,2,因此不适合用于植物病毒病快速诊断。微波炉固定可以使用相似的超微结构常规样品制备3-5后所观察到的结果用于TEM调查样品制备时间大幅度减少。许多不同的定制的微波器件是目前可用的,这可用于生物样品用于TEM调查5-8成功地固定和嵌入。在这项研究中,我们表现出对烟草花叶病毒(TMV)感染烟草植物,它有可能在大约半天时间,通过使用微波辅助样品制备的T诊断叶片超微结构的改变EM。我们选择了与市售的微波装置进行本研究,因为它执行几乎完全自动样品制备5相反,其他可用的设备,其中许多步骤仍然要手动执行6-8,因此更费时费力。作为执行剩余的TMV病叶及以下检查超微结构和大小的汁液中的病毒颗粒完全自动染色阴性样品制备过程中可进行固定和嵌入。
微波设备已被证实为TEM样品制备提供快速和可靠的超微结构数据在几个小时内3,4,16。本研究中所用的方法取得的细胞器和膜的细微结构保存类似于常规和cryofixed样品5,15与一个巨大的优点是减少在样品固定和嵌入3天或更长的时间从约2小时。这代表目前现有文献中的TEM样品制备最快的协议。本研究中所描述的方法结合微波植物具有负的染色方法允许一个明确的和快速鉴定TMV-诱导的超微结构改建和抗病毒剂本身用于TEM的样品制备。 TMV诱导的超微结构的变化可以进行调查后修剪,切片和染色后,在约4小时内开始后固定在透射电子TRON显微镜。使用完全自动试样制备模式释放研究者在过渡期间进行负染色,以确定病毒剂的大小和宽度。因此,我们可以得出这样的结论:这种方法允许一个明确的和快速诊断的植物病毒病的一半左右,这一天是非常重要的未来在农业和科学实验的植物植物病理学。由于此方法也可用于动物和人类疾病的快速诊断,它有一个大的潜在的未来的应用在医疗和兽医病理学。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由奥地利科学基金会(FWF,P20619,P22988,以BZ)的支持。
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Glutaraldehyde | Agar Scientific Ltd. | R1312 | |
Osmium tetroxide | Agar Scientific Ltd. | R1022 | |
Agar 100 resin | Agar Scientific Ltd. | R1043 | |
Dodecenyl succinic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1051 | |
Methyl nadic anhydride | Agar Scientific Ltd. | R1081 | |
Benzyl dimethylamine | Agar Scientific Ltd. | R1060 | |
Lead citrate | Agar Scientific Ltd. | R1210 | |
Uranyl acetate | Agar Scientific Ltd. | R1260A | |
Phosphotungstic acid | Agar Scientific Ltd. | R1213 | |
Formvar | Agar Scientific Ltd. | R1202 | |
Leica EM AMW | Leica Microsystems | ||
Leica (Reichert) Ultratrim | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Leica (Reichert) Ultracut S | Leica Microsystems | Newer model is available | |
Diatome Ultra 45 | Gröpl | ||
Philips CM10 TEM | FEI (formerly Philips) | Newer model is available | |
Cell D | Olympus Inc. | ||
Optimas 6.5.1 | Media Cybernetics Inc. | Newer version is available |