在这里,我们描述了从小鼠肝的肝星状细胞的分离方法。小鼠肝脏星状细胞的纯化,消化<em>原位</em><em>在体外</em>链霉蛋白酶,胶原酶治疗之前,密度梯度离心法。这种技术产生高纯度的肝星状细胞。
肝星状细胞是明星般形态的肝居民细胞,并在位于肝窦内皮细胞和肝细胞 1,2之间的狄氏空间。星状细胞来源于骨髓前体和存储总体内维生素A 1,2至80% 。激活后,星状细胞分化成肌纤维母细胞产生细胞外基质,从而促进肝纤维化3。根据合同的能力,肌纤维母细胞星状细胞能调节血管张力与门脉高压症4相关。最近,我们表明,肝星状细胞是有效的抗原提呈细胞,并能激活NKT细胞以及传统的T淋巴细胞5。
在这里,我们提出了一种从小鼠肝的肝星状细胞的高效制备方法。由于他们的窦周本地化,肝星状细胞的分离是一个多步骤的过程。为了呈现星状细胞Disse间隙隔离, 就地消化酶链霉蛋白酶E和胶原酶体育以下灌注小鼠肝脏灌注,肝组织与链霉蛋白酶E和胶原酶P遭受额外的酶处理体外 。随后,该方法需要大量的维生素A储存在肝星状细胞的脂滴的优势。此功能允许从其他类型的肝细胞在8%Nycodenz梯度离心星状细胞的分离。这里描述的协议产生的星状细胞的高纯度和均匀的人口。纯度可评估染色标记分子胶质纤维酸性蛋白(GFAP),荧光显微镜或流式细胞仪分析前的准备工作。此外,光镜下显示星形海港高量的脂滴的肝星状细胞的独特的外观。
两者合计,我们提出一个详细的协议为有效地隔离对肝星状细胞,包括有代表性的图像,其外观形态和GFAP的表达,有助于确定星状细胞实体。
肝星状细胞在肝脏调节必不可少的生理和病理过程。此外,星状细胞具有抗原提呈属性,使其肝免疫反应的一个重要组成部分。虽然肝星状细胞在肝细胞总数占10-15%,这些细胞的分离是具有挑战性的,因为他们在狄氏窦周空间的本地化。
在这里,我们提出了一个简单的方法来隔离 ,就地消化和后续梯度离心法从小鼠肝脏中的肝星状细胞。此协议允许适合免疫分析,?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由史密斯一家在生物医学研究和NIH的RO1 AI083426 – 01(星期六)的卓越奖。帕特里克Maschmeyer和梅拉妮Flach支持勃林格殷格翰基金会博士奖学金。