Nós descrevemos um protocolo para a microfabricação do dispositivo de geração de gradiente microfluídicos que pode gerar gradientes espaciais e temporais bem definidos em microambiente. Nesta abordagem, o dispositivo de geração de gradiente microfluídicos pode ser usado para estudar a migração celular dirigido, a embriogênese, cicatrização de feridas, e metástase de câncer.
Abstract
A fabricação e operação de um dispositivo de geração de gradiente microfluídicos para estudar o comportamento celular é descrito. Uma plataforma microfluídica é uma ferramenta que permite experimental, precisamente porque pode manipular fluxos de líquidos, permitem alto rendimento experiências, e gerar gradientes de concentração estável solúvel. Comparado com os geradores gradiente convencional, poli (dimetilsiloxano) (PDMS) com base em dispositivos microfluídicos pode gerar gradientes de concentração de fatores de crescimento estável, com perfis bem definidos. Aqui, nós desenvolvemos simples gradiente de geração de dispositivos microfluídicos com três entradas distintas. Três microcanais combinados em um microcanal de gerar gradientes de concentração. A estabilidade ea forma de gradientes de fator de crescimento foram confirmados por fluoresceína isothyiocyanate (FITC)-dextran com peso molecular semelhante ao fator de crescimento epidérmico (EGF). Usando este dispositivo micro, foi demonstrado que fibroblastos expostos a gradientes de concentração de EGF migraram para concentrações mais elevadas. A orientação direcional de migração celular e motilidade das células migrando foram quantitativamente avaliados por análise de células de rastreamento. Assim, este dispositivo de geração de gradiente microfluídicos pode ser útil para estudar e analisar o comportamento das células migratórias.
Protocol
A. Microfabricação do dispositivo de geração de gradiente microfluídicos O wafer Si é tratada com plasma de oxigênio reativo (5 min de 30W, Harrick Científico, NY). Fotorresiste negativo (SU-8 50, Microchem, MA) é spin-revestido a 1000 rpm por 1 min em um wafer de silício. O wafer é mole cozido a 65 ° C por 10 min e, posteriormente, a 95 ° C por 30 min em uma placa. O wafer é exposto à luz UV (200W) por 3 minutos através de uma máscara de transparência com uma d…
Discussion
Células expostas a gradientes de concentração estável de EGF em um dispositivo micro migraram para concentrações mais elevadas. A orientação direcional de migração celular, índice quimiotático, motilidade das células migrando foram investigadas pela análise de células de rastreamento. Portanto, esta plataforma de geração de gradiente microfluídicos poderia ser útil para estudar metástase de câncer, a embriogênese, e orientação axônio.
Chung, B. G., Manbachi, A., Saadi, W., Lin, F., Jeon, N. L., Khademhosseini, A. A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology. J. Vis. Exp. (7), e271, doi:10.3791/271 (2007).