우리는 잘 정의된 microenvironment의 공간 및 시간적 그라디언트를 생성할 수있는 그라디언트 생성 microfluidic 장치의 microfabrication을위한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법에서는, 그라디언트 생성 microfluidic 장치가 감독 셀 마이 그 레이션, embryogenesis, 상처 치유, 및 암 전이를 공부하는 데 사용할 수 있습니다.
Abstract
세포 행위를 연구에 대한 제조 및 그라디언트 생성 microfluidic 장치의 작동을 설명합니다. 그것이 정확하게, 유체 흐름을 조작하는 높은 처리량 실험을 활성화하고 안정적인 용해 농도 그라디언트를 생성할 수 있기 때문에 microfluidic 플랫폼, 활성화 실험 도구입니다. 기존의 기울기 발전기, 폴리 (dimethylsiloxane) (PDMS)에 비해 기반의 microfluidic 장치는 잘 정의된 프로필 성장 요인의 안정적인 농도 기울기를 생성할 수 있습니다. 여기, 우리는 별도의 세 가지 인레츠와 간단한 그라디언트 생성 microfluidic 장치를 개발했다. 세 microchannels은 농도 기울기를 생성 한 microchannel에 결합. 성장 인자의 그라디언트의 안정성과 형태는 표피 성장 인자 (EGF)와 비슷한 분자량과 플루오레신 isothyiocyanate (FITC) – dextran에 의해 확인되었다. 이 microfluidic 장치를 사용하여, 우리는 EGF의 농도 기울기에 노출된 섬유아 세포가 높은 농도쪽으로 마이 그 레이션 것을 보여주었다. 마이 그 레이션 세포의 세포 마이 그 레이션 및 운동성의 방향 방향은 양적 세포 추적 분석에 의해 평가되었다. 따라서,이 그라디언트 생성 microfluidic 장치 마이 그 레이션 세포의 동작을 연구하고 분석을 위해 유용할 수 있습니다.
Protocol
그라디언트 생성 microfluidic 장치의 A.의 Microfabrication 시 웨이퍼는 반응 산소 플라즈마 (30W, Harrick 과학에서 5 분, NY)로 처리됩니다. 부정적인 포토 레지스트 (SU – 8 50 Microchem, MA)가시 웨이퍼 1 분 1,000 RPM에서 스핀 – 코팅입니다. 웨이퍼는 부드럽 65 구운 ° 95시 이후에 10 분 및 들면 C ° 열판 30 분 C. 웨이퍼 30 μm의 최소 기능 크기가 투명 마스크를 통해 3 분위한 자외선 (200W…
Discussion
세포가 높은 농도쪽으로 마이 그 레이션 microfluidic 장치에서 EGF의 안정적인 농도 기울기에 노출. 셀 마이 그 레이션, chemotactic 지수, 마이 그 레이션하는 세포의 운동성의 방향 방향은 셀 추적 분석에 의해 조사되었다. 따라서,이 그라디언트 생성 microfluidic 플랫폼은 암 전이, embryogenesis, 그리고 축삭지도를 공부하는 데 유용 수 있습니다.
Chung, B. G., Manbachi, A., Saadi, W., Lin, F., Jeon, N. L., Khademhosseini, A. A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology. J. Vis. Exp. (7), e271, doi:10.3791/271 (2007).