Bu makale, gen teslimat çalışmaları ve IVIS biyoparlaklık görüntüleme kullanarak gen ekspresyonu sonraki analiz için hasta doku dilim kültür açıklar.
Abstract
Bu video ex vivo gen teslim çalışması için bir model olarak hasta doku kullanımı anlatılmaktadır. Taze hasta doku cerrahi sırasında elde dilimlenmiş ve kültür tutulur. Ex vivo model sistem sağlam hasta doku ve gen ekspresyonu biyoparlaklık görüntüleme IVIS algılama sistemi kullanılarak analiz genlerin fiziksel teslimat için sağlar. Bioluminescent algılama sistemi doku kurban için ihtiyaç olmadan hızlı ve doğru tek tek dilimler içinde gen ekspresyonu kantifikasyon göstermektedir. Bu dilim doku kültürü sistemi normal ve malign doku da dahil olmak üzere çeşitli doku tiplerinin kullanılan ve bize sağlam doku heterojen doğası ve yüksek derecede bireysel hastalar arasında değişkenlik etkilerini incelemek sağlar. Bu model sistemi ve klinik araştırmaya girmeden önce bir tamamlayıcı preklinik modu olarak hayvan modellerinde bir alternatif olarak bazı durumlarda kullanılabilir.
Protocol
Medya ve Reaktifler hazırlanması Antibiyotik Çözüm Fosfat tamponlu salin (PBS) 200 U / ml penisilin, 200 mcg / ml streptomisin, 5 mg / ml fungizone Toplama ve Arıtma orta Dulbecco'nun 200 U / ml penisilin modifiye kartal orta (DMEM), 200 mg / ml streptomisin, 5 mg / ml fungizone Kültür ortamı Koleksiyon orta% 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal sığır serumu içeren I. D…
Discussion
Biz ex vivo olarak hasta doku kültürü yöntemi ve insan doku içinde sabit olmayan gen teslim değerlendirilmesi için bioluminescent algılama sistemi açıklanmaktadır. Bu yöntem basit ve tekrarlanabilir bir kültür dokusu dilim bir şekilde sunmaktadır. Malign doku da dahil olmak üzere çeşitli insan doku içine bozulmamış insan dokusu içine gen teslim çalışmada, gen teslim analizini sağlar ve saygı ile bireysel hastalar arasında değişkenlik derecesi yüksek olan etkileri ile ilgili önem…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Cork Güney Revir Victoria Üniversitesi Hastanesi Göğüs fonu, İrlanda Kanser Derneği (CRI07TAN) ve Cork Kanser Araştırma Merkezi ile finanse edildi. CMV organizatörü transkripsiyonel kontrol altında çoğaltma beceriksiz rekombinant Adenovirüs 5 parçacıklar Glasgow Üniversitesi Prof. Andrew Baker, bir tür hediye edildi.
Rajendran, S., Salwa, S., Gao, X., Tabirca, S., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery. J. Vis. Exp. (46), e2378, doi:10.3791/2378 (2010).