Ex vivo-Kultur der Patient Tissue & Prüfung von Gentransfer
Summary
Dieser Artikel beschreibt die Kultur der Patientensicherheit Gewebeschnitten für den Gentransfer-Studien und die anschließende Analyse der Genexpression mittels IVIS Biolumineszenz-Bildgebung.
Abstract
Dieses Video beschreibt die Verwendung von Gewebe des Patienten als ex vivo-Modell für die Untersuchung der Gene Delivery. Frisches Gewebe des Patienten zum Zeitpunkt der Operation gewonnen wird in Scheiben geschnitten und in Kultur gehalten. Die ex vivo-Modell-System ermöglicht die physische Lieferung von Genen in intakte Gewebe des Patienten und die Genexpression durch Biolumineszenz-Bildgebung mit dem IVIS Detection System analysiert. Die Biolumineszenz Detection System zeigt eine schnelle und genaue Quantifizierung der Genexpression in einzelne Segmente, ohne dass Gewebe zu opfern. Diese Scheibe Gewebekultur-System kann in einer Vielzahl von Gewebetypen einschließlich der normalen und malignen Gewebe verwendet werden und ermöglicht es uns, die Auswirkungen der heterogenen Natur der intakten Gewebes und der hohe Grad an Variabilität zwischen den einzelnen Patienten zu untersuchen. Dieses Modell System könnte in bestimmten Situationen als Alternative zu Tierversuchen und als ergänzende präklinische Modus vor dem Eintritt in klinische Studie verwendet werden.
Protocol
Discussion
Wir beschreiben eine ex vivo Patienten Gewebekultur-Methode und Biolumineszenz Detection System für die Beurteilung der Gen-Lieferung innerhalb von nicht fixierten menschlichen Gewebe. Das Verfahren bietet eine einfache und reproduzierbare Weise der Kultivierung Gewebeschnitten. Es hat ein erhebliches Potenzial, wie es das Studium der Gentransfer in intakte menschliche Gewebe, die Analyse der Gene Delivery ermöglicht in einer Vielzahl von menschlichem Gewebe einschließlich bösartiger Gewebe und können wich…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch die Cork South Infirmary Victoria University Hospital Breast Fonds, die Irish Cancer Society (CRI07TAN) und Cork Krebsforschungszentrum finanziert. Replication inkompetent rekombinanten Adenovirus 5 Partikel unter der transkriptionellen Kontrolle des CMV-Promotors war eine Art Geschenk von Prof. Andrew Baker, University of Glasgow.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | ||
| Firefly Luciferin | Biosynth, Switzerland | |||
| Dermabond | Johnson & Johnson | |||
| Vibrotome | Leica microsystems | VT 1000 A |
References
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