Summary

Toll-like reseptör Etkinleştirme Düzenlenmesi Neu1 Sialidase Faaliyet Algılama

Published: September 07, 2010
doi:

Summary

Sialidase testi canlı makrofaj hücre yüzeyinde reseptör düzeyinde iltihabi hastalıklar mikrobik enfeksiyonlar ve katılımı TLR sensörleri yeni moleküler mekanizma (lar) aydınlatmak basit bir teknik yaklaşım.

Abstract

Memeli Toll-like reseptörler (TLR), patojen ilişkili moleküler desenleri tanımaya reseptörlerinin bir aile. Sadece TLR mikrobiyal önemli sensörler (örneğin, virüs, bakteri ve parazit) enfeksiyonları, onlar da muhtemelen otoimmün hastalıklar, bulaşıcı hastalıklar, enfeksiyon hastalıkları, patofizyolojisinde önemli bir rol oynamaktadır. Böylece, şiddeti ve süresi, bulaşıcı hastalıklara karşı TLR tepkilerin sıkı kontrol edilmelidir. Bu sensör reseptörler, ligand etkileşimleri ve sinyal bileşenleri yapısal bütünlüğünü anlamak sonraki immünolojik korunması için gerekli olduğunu izler. Ayrıca sensör manipülasyon yoluyla hastalık modifikasyonu için önemli fırsatlar sağlayacaktır. TLR sensörleri sinyal yolakları iyi karakterize olmasına rağmen, parametreler sensörleri ve ligandlar hala yetersiz tanımlanmış kalır arasındaki etkileşimleri kontrol. Biz son zamanlarda, daha önce 1,2 görülmemiştir, doğal ligand TLR aktivasyonu yeni bir mekanizma tespit ettik. Bu ligand bağlı TLR aktivasyon Neu1 sialidase aktivasyonu ile sıkıca kontrol edildiğini göstermektedir. Ayrıca Neu1 sıkıca Neu1 ve matriks metalloproteinaz-9 (MMP-9) reseptörleri 4 karmaşık çapraz konuşma içeren TrkA ve TrkB 3 gibi nörotrofin reseptörleri düzenleyen bildirdin. Sialidase tahlil başlangıçta GPCR Gαi proteinleri ve MMP-9 5 üzerinden makrofajlar, dendritik hücreler ve fibroblast hücreleri hücre yüzeyinde Neu4 sialidase aktivasyonu, bir roman ligand, thymoquinone bulmak için kullanabileceğiniz olmuştur. TLR reseptörleri için, bizim veri Neu1 sialidase zaten, TLR-2, -3 ve -4 reseptörleri ile kompleks ve iki reseptör bağlayıcı ligand üzerine indüklenir göstermektedir. Aktive Neu1 sialidase hidroliz sialyl α-2 TLR-4 dimerization, MyD88/TLR4 karmaşık işe alım, NFkB aktivasyonu ve pro-inflamatuar hücre yanıtlarını sterik hinderance kaldırmak için bağlayıcı ligand uzak ,3-bağlantılı β-galactosyl artıkları. Ortak bir raporda, Neu1 sialidase 6 makrofaj hücreleri fagositoz düzenleyen gösterilmiştir. Birlikte ele alındığında, sialidase testi ligand bağlı reseptör aktivasyonu moleküler mekanizmaları güçlü yorumlarla bize sağlamıştır. Neu1 sialidase ve TLR aktivasyonu arasında kesin bir ilişki, Trk reseptörlerinin henüz tam olarak açıklanamamış olmasına rağmen, hücre düzenleme yollar öncü ya da yeni bir yaklaşımı temsil eder.

Protocol

1. Dondurulmuş Makrofaj Hücreler kurtarılıyor -80 Donmuş hücreleri diriltmeyi önce ° C derin dondurucu, bir ihtiyacı% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve 5 mg / plasmocin ml ile desteklenmiş filtrelenmiş steril Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta (DMEM) ile kültür ortamı hazırlamak için. Plasmocin araştırma hücre kültürlerinin mycoplasma kirlenme ortadan kaldırmak ve önlemek için kullanılan bir antibiyotik çözümdür. Donmuş hücreleri bir flakon için, bir 4 ml, 1 ml ste…

Discussion

Canlı makrofaj hücreleri 2 sialidase faaliyet algılamak için yeni geliştirilen testi kullanılarak, BMC-2 de canlı doza bağlı olarak makrofaj hücreleri DC-2.4 dendritik hücreler canlı ligand bağlı sialidase faaliyet sialidase aktivite tespit etmek için bu teknolojiyi kullandı HEK-TLR4/MD2, HEK293 SP1 meme adenokarsinom hücreleri, insan WT ve 1140F01 ve WG0544 tip I sialidosis fibroblast hücreleri. Tamiflu gibi nöraminidaz inhibitörleri (oseltamivir fosfat) bir IC 50 0,0194 mcM BM…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

MRS hibe Kısmi destek Doğa Bilimleri ve Mühendisliği Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada, Nöroloji Araştırma, ARC Harry Botterell Vakfı ve Garfield Kara Kardiyovasküler Araştırma ve Geliştirme Fonu. SRA Kraliçe Üniversitesi Araştırma Ödülü ve Robert J. Wilson Bursu bir alıcı. PJ Kraliçe Lisansüstü Ödülü ve Robert J. Wilson Bursu, bir alıcı. AG ve SA Kraliçe Lisansüstü Ödülü alıcıları. SF Bilim ve Teknoloji (OGSST) Ontario Yüksek Lisans Bursu layık görüldü. AG Kraliçe Franklin Bracken Lisansüstü Bursu almıştır. SA Kraliçe RS McLaughlin Yüksek Lisans Bursu almıştır.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM   Gibco, Rockville, MD    
4-MUNANA   Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA    
Fetal calf serum   HyClone, Logan, Utah, USA    
DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media   DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA S3023 15 mL
Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)   Hoffman La Roche    

Play Video

Cite This Article
Amith, S. R., Jayanth, P., Finlay, T., Franchuk, S., Gilmour, A., Abdulkhalek, S., Szewczuk, M. R. Detection of Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation. J. Vis. Exp. (43), e2142, doi:10.3791/2142 (2010).

View Video