Summary

Внутричерепное Инъекция адено-ассоциированные вирусные векторы

Published: November 17, 2010
doi:

Summary

Здесь мы представляем внутричерепное введение вектора AAV для флуоресцентной маркировки нейронов и глии в зрительной коре.

Abstract

Внутричерепное инъекции вирусных векторов спроектирован, чтобы выразить флуоресцентный белок является универсальный метод маркировки для визуализации конкретных подмножеств клеток в разных областях мозга, как в естественных условиях и в мозгу разделов. В отличие от введения флуоресцентных красителей, вирусные маркировки предлагает нападения на отдельных типов клеток и является менее дорогостоящим и трудоемким, чем создание трансгенных линий мышей. В этой технике, адено-ассоциированные вирусные (AAV) вектор вводится интракраниально использованием стереотаксической координаты, микропипетки и автоматизированные насос для точной доставки AAV в нужную область с минимальным повреждением окружающих тканей. Инъекция параметры могут быть адаптированы для отдельных экспериментов, регулируя животных возрастом в месте инъекции, инъекции место, объем впрыска, скорость впрыска, AAV серотипа и промоутер вождения экспрессии генов. В зависимости от выбранных условиях, вирусно-индуцированной экспрессии трансгена может позволить визуализации группы клеток, отдельные клетки или тонкого клеточные процессы, вплоть до уровня дендритных шипиков. Эксперимент показал здесь изображен инъекции двухцепочечной AAV выражения зеленого флуоресцентного белка для маркировки нейронов и глии в мышь первичной зрительной коры.

Protocol

1. Обработка от вирусов и хранения Правильная защита и методов обработки следует выбирать в зависимости от уровня биобезопасности вирус, который будет использоваться. Эти практики могут быть найдены в Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских лабораторий 5-е и…

Discussion

Вирусно-опосредованной доставки генов имеет большой потенциал для изучения неврологических процессов и лечения заболеваний мозга 1,2,3. Большую универсальность этой методики может быть также использована для флуоресцентно этикетке клетки для работы с изображениями, как в про?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа стала возможной за счет субсидий из NIH (EY012977), Карьера премии в области биомедицинских наук от Burroughs Wellcome фонд, Фонд Уайтхолл, и Sloan Foundation (АКМ).

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Stoelting Mouse and Neonatal Rat Adaptor   Stoelting 51625 Regular stereotax for securing animals for surgery may be substituted
Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm   Fine Science Tools 14084-08  
Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved   Fine Science Tools 11152-10  
Dumont #5/45 Forceps- Dumoxel Standard Tip, 11cm, angled   Fine Science Tools 11251-35 Extra-fine tipped forceps for performing craniotomy
Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm   Fine Science Tools 11000-12  
Microtorque Control Box and Tech2000 handpiece   Ram Products, Inc. TECH2000ON/OFF Dental drill
Micro Drill Stainless Steel Burrs 1.4mm tip diameter   Fine Science Tools 19008-14  
Wiretrol micropipettes, to deliver 1-5 Ul   VWR International/ Drummond 5-000-1001 or 53480-287  
Mineral oil   VWR International 29447-338  
Manual Micromanipulator and Tilting Base (right-handed)   World Precision Instruments, Inc. M3301-M3-R Used for determining stereotaxic co-ordinates
UltraMicroPump (UMP3) (one) with SYS-Micro4 Controller   World Precision Instruments, Inc. UMP3-1  
Sutures   VWR International 95056-952  
P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller   Sutter Instruments P-97  
Tobradex       Available from your institution’s veterinary services

References

  1. Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O’Malley, K. L., During, M. J. Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain. Nat Genet. 8, 148-154 (1994).
  2. Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors. Hum Gene Ther. 17, 807-820 (2006).
  3. Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression. Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).
  4. Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors. Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).

Play Video

Cite This Article
Lowery, R. L., Majewska, A. K. Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors. J. Vis. Exp. (45), e2140, doi:10.3791/2140 (2010).

View Video