Summary

Патч зажим Recordings от мыши нейронов сетчатки в темно-адаптированной фрагмент подготовка

Published: September 12, 2010
doi:

Summary

Здесь мы опишем процедуру для получения темно-адаптированных ломтиками мыши сетчатки для электрофизиологических записей.

Abstract

Наш визуальный опыт начинается, когда зрительного пигмента сетчатки в нашей фоторецепторов поглощает фотоны света энергию и инициирует каскад внутриклеточных событий, приведших к закрытию циклических нуклеотидов закрытых каналов в клеточной мембране. В результате изменения мембранного потенциала, в свою очередь приводит к сокращению количества нейромедиаторов релиз с обеих палочек и колбочек синаптических терминалов. Чтобы определить, насколько световых вызвало изменение мембранного потенциала фоторецептора приводит к течению активность в сетчатке, ученые сделали электрофизиологических записей из сетчатки подготовки ломтик за 1,2 лет. В прошлом эти кусочки были вырезаны вручную с лезвием на ткани сетчатки, который прилагается к фильтровальной бумаге, а в последние годы один метод нарезки была разработана котором ткани сетчатки встраивается в странах с низким агар температуры гелеобразования и нарезанный в прохладном растворе с вибрирующий микротома 3,4. Этот препарат производит сетчатки ломтики меньше повреждений поверхности и очень надежные световых вызвали ответы. Здесь документ как эта процедура может быть сделано при инфракрасном свете, чтобы избежать обесцвечивания зрительного пигмента.

Protocol

1. Подготовка электродов Подготовка записи и электродов сравнения, опуская их как в 1M NaCl и вождения 15V между ними с помощью 1 Гц синусоидальной волны для ~ 20 с Сделать запись электродов использовании микропипетки съемник (Саттер инструменты Р-97). Для патч-пипеток использование …

Discussion

Фрагмент записи с сетчатки позвоночных были сделаны десятилетиями 1,2, и были весьма успешны в обеспечении более глубокого понимания того, как схема сетчатки кодирует падающего света. Преимущества резки с вибрирующим микротома, а не непосредственно с лезвием в том, что сетчатки л?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана NIH Грант EY17606 (APS).

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Micropipette Puller   Sutter Instruments P-97  
Borosilicate glass   Sutter Instruments B120-69-10  
Polyethylene tubing   Intramedic PE205  
Agar   Sigma A7002  
Low gelling temp agarose   Sigma A0701  
Ames’ Medium   Sigma A1420  
Penicillin-Streptomycin   Sigma P0781  

References

  1. Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
  2. Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
  3. Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
  4. Armstrong-Gold, C., &amp, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
  5. Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
  6. Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).

Play Video

Cite This Article
Arman, A. C., Sampath, A. P. Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation. J. Vis. Exp. (43), e2107, doi:10.3791/2107 (2010).

View Video