Новый универсальный метод для наблюдения микроциркуляцию представлена. Считается, подходит для долгосрочного наблюдения, так и для комбинации с pharmacophysiological или молекулярно-биологических вмешательств.
Abstract
ИСТОРИЯ ВОПРОСА: Регулирующие факторы и подробные физиологии микроциркуляции в естественных условиях остаются окончательно не уточнена после многих различных форм визуализации были изобретены. Хотя многие макроскопических параметров потока крови отражает скорость течения, изменения скорости кровотока и красные кровяные клетки (эритроциты) поток не выполняется линейная зависимость в микроскопических наблюдений. Есть сообщения, расхождения между РБК и РБК скорости потока, РБК потока и потока плазмы объема и пространственной и временной неоднородности регулирование стока в периферических тканях в микроскопических наблюдений, научной основы для требований более детальных исследований в микроциркуляторном регулированию использования прижизненной микроскопии.
Методы: Мы изменили метод Джефф Лихтман о в естественных условиях микроскопических наблюдений мышцы мыши грудино-сосцевидный. Мыши под наркозом, вентилируемые, и вводили PKH26L-флуоресцентно меченых эритроцитов для микроскопического наблюдения.
РЕЗУЛЬТАТ И ВЫВОДЫ: флуоресцентно меченых эритроцитов обнаружены и отличается хорошо широким полем зрения микроскопа. Сокращение мышц вызванные электрической стимуляцией индуцированный рост РБК потока. Количественная оценка других параметров, включая РБК скорости и плотности капилляров было возможно. Мыши хорошо переносится операции, инъекции окрашенные эритроциты, микроскопические наблюдения и электрической стимуляции. Нет мышц или повреждению кровеносных сосудов наблюдается, предполагая, что наш метод является относительно менее инвазивных и подходит для длительных наблюдений.
Protocol
Мембраны эритроцитов окрашивание Мышь клетки красной крови были исправлены с тем же штаммом мыши с гепаринизация. Мышь РБК окрашивали PKH26 красителя (551/567 нм, красный флуоресцентный комплект компоновщика клетки, Sigma, США). РБК промывали в PBS и инкубировали с 2 мкм решение PKH…
Discussion
Важно techinical точек таковы: (1) поддержание физиологического состояния животного (вентиляция, рН perfusative решение, температуры тела), (2) объемом впрыска от окрашенных РБК, и (3) условия наблюдения (оптимальный объектив Выбор, интенсивности флуоресценции). Потенциальные будущие приложения являются: (а) вм?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим JW Лихтман за его советы в в естественных условиях наблюдения мышц.
Asai, A., Sahani, N., Ouchi, Y., Martyn, J., Yasuhara, S. In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy. J. Vis. Exp. (4), e210, doi:10.3791/210 (2007).