Medição in vivo Micro-circulação no músculo esquelético por Intra-vital Microscopia
Summary
Um novo método versátil para a observação da microcirculação é apresentado. Ele é considerado adequado para observação a longo prazo, e para combinação com pharmacophysiological ou molecular intervenções biológicas.
Abstract
FUNDAMENTO: Os fatores de Regulamentação e fisiologia detalhada na microcirculação vivo permaneceram não totalmente esclarecido depois de muitas diferentes modalidades de imagem tinha inventado. Enquanto muitos parâmetros macroscópicos do fluxo de sangue refletem a velocidade de fluxo, as mudanças na velocidade do fluxo sanguíneo e de glóbulos vermelhos (RBC) de fluxo não mantém relação linear nas observações microscópicas. Há relatos de discrepância entre velocidade e fluxo RBC RBC, fluxo e volume de fluxo RBC plasma, e de heterogeneidade espacial e temporal da regulação do fluxo nos tecidos periféricos em observações microscópicas, uma base científica para a exigência de estudos mais detalhados na regulação da microcirculação usando microscopia intravital.
MÉTODOS: Foram modificados método de Jeff Lichtman de observação microscópica em vivo dos músculos esternomastoideu mouse. Os ratos são anestesiados, ventilados, e injetados com PKH26L-fluorescente hemácias marcadas para observação microscópica.
RESULTADO E CONCLUSÕES: hemácias fluorescente etiquetado são detectados e distinguidos bem por um microscópio de campo amplo. Contração muscular evocado pelo aumento da estimulação elétrica induzida em RBC fluxo. Quantificação de outros parâmetros, incluindo RBC velocidade ea densidade capilar foram viável. Camundongos bem tolerada a cirurgia, a injeção de hemácias marcadas, observação microscópica e estimulação elétrica. Nenhum músculo ou danos dos vasos sanguíneos foi observada, sugerindo que o nosso método é relativamente menos invasivo e adequado para observações a longo prazo.
Protocol
Discussion
Entre os principais pontos techinical são as seguintes: (1) manutenção do estado fisiológico do animal (pH ventilação, da temperatura do corpo perfusative solução,), (2) volume de injeção da RBC manchado, e (3) condições para a observação (lente ideal intensidade de seleção, a fluorescência). Potencial de aplicações futuras são as seguintes: (a) combinação com pharmacophysiological e / ou molecular intervenções biológicas, (b) a observação a longo prazo de arterio / arteriolo-esclerose e neovascularização.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a JW Lichtman ao conselho dele para a observação in vivo dos músculos.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PKH26 dye | Sigma | 551/567 nm; Red fluorescent cell linker kit | ||
| C57BL/10 mice | Animal | Three to six month old males | ||
| pentobarbital | anesthetic, 50mg/kgBW, i.p. |
References
- Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice. J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).
