Summary

Imaging in vivo del transgenico parassiti Leishmania in un host live

Published: July 27, 2010
doi:

Summary

Un<em> In vivo</em> Sistema di imaging viene utilizzato per generare misurazioni quantitative di infezione murino con il protozoo Trypanosomatid<em> Leishmania</em>. Questo è un metodo non invasivo e non letali per il rilevamento di parassiti esprimere luciferasi in molti tessuti nel corso della cronica<em> Leishmania</em> Spp. infezione.

Abstract

Specie diverse di<em> Leishmania,</em> Un protozoo parassita della famiglia<em> Trypanosomatidae</em>, In genere causano diverse manifestazioni della malattia umana. Le forme più comuni della malattia sono la leishmaniosi viscerale (VL) e la leishmaniosi cutanea (CL). Modelli murini di leishmaniosi sono ampiamente utilizzati, ma la quantificazione degli oneri parassiti durante la malattia murino richiede topi per l'eutanasia in vari momenti dopo l'infezione. Carichi parassita vengono poi misurate al microscopio, limitando test di diluizione, qPCR o amplificazione del DNA del parassita. Il<em> In vivo</em> Immagine di sistema (IVIS) è un pacchetto software integrato che consente il rilevamento di un segnale bioluminescente associato con le cellule negli organismi viventi. Sia per ridurre al minimo dell'uso di animali e di seguire longitudinalmente infezioni negli individui, nei modelli in vivo per l'imaging<em> Leishmania</em> Spp. causando VL o CL sono stati stabiliti. I parassiti sono stati progettati per esprimere la luciferasi, e questi sono stati introdotti in topi o intradermica o endovenosa. Misurazioni quantitative della bioluminescenza guida luciferasi del transgenico<em> Leishmania</em> Parassiti all'interno del mouse sono stati realizzati utilizzando IVIS. Topi individuali possono essere ripreso più volte durante gli studi longitudinali, che ci permette di valutare la variabilità inter-animale nel inoculi iniziali parassita sperimentali, e di valutare la moltiplicazione dei parassiti nei tessuti del mouse. I parassiti sono rilevati con elevata sensibilità in luoghi cutanea. Anche se è molto probabile che il segnale (fotoni / secondo / parassita) è più basso in organi viscerali profondi della pelle, ma il confronto quantitativo di segnali in siti superficiali rispetto profondo non sono stati fatti. E 'possibile che i numeri parassita tra i siti corpo non sono direttamente confrontabili, anche se i carichi parassita nei tessuti stessi possono essere confrontati tra topi. Esempi di una specie visceralizing (<em> L. infantum chagasi</em>) E una specie che causano la leishmaniosi cutanea (<em> L. mexicana</em>) Sono mostrati. La procedura IVIS può essere utilizzata per monitorare e analizzare modelli animali piccoli di una vasta gamma di<em> Leishmania</em> Specie che causano le diverse forme di leishmaniosi umana.

Protocol

1. L'infezione di piccoli animali transgenici con Leishmania 1. Parasite linee Transgenici Leishmania spp. parassiti che esprimono luciferasi vengono generate utilizzando un episomiale o un vettore di integrazione, come riportato. 1 2 linee clonale sono preferiti. Due punti importanti sono: (A) luciferasi integrato è preferibile luciferasi episomiale, dal momento che in teoria queste righe parassita deve c…

Discussion

Il sistema di imaging in vivo (IVIS) fornisce un metodo per l'imaging animale intero o in vivo modelli sperimentali di infezione di imaging diverse forme di leishmaniosi. 18,16 La Leishmania spp. parassiti può essere progettato per esprimere la luciferasi lucciola a un livello che viene rilevato in vivo con la tecnologia di imaging IVIS. Uno dei principali vantaggi di questo metodo è che permette non invasivo visualizzazione di Leishmania spp. dentro l'os…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato finanziato in parte da una borsa di studio al merito recensione dal Department of Veterans Affairs, da sovvenzioni NIH AI045540, AI067874, AI076233-01 e AI080801 (MEW), e da AI29646 (SMB). Il lavoro è stato svolto in parte durante finanziamento di CT e JG dal NIH T32 AI07511.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
D-Luciferin Potassium Salt Reagent Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) 122796  
IVIS Imaging System 200 Series Equipment Caliper LifeSciences   Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum.

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Cite This Article
Thalhofer, C. J., Graff, J. W., Love-Homan, L., Hickerson, S. M., Craft, N., Beverley, S. M., Wilson, M. E. In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host. J. Vis. Exp. (41), e1980, doi:10.3791/1980 (2010).

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