Summary

L'imagerie in vivo des parasites Leishmania transgéniques dans un hôte en direct

Published: July 27, 2010
doi:

Summary

Une<em> In vivo</em> Système d'imagerie est utilisée pour générer des mesures quantitatives de l'infection murin avec le protozoaire trypanosomatides<em> Leishmania</em>. C'est une méthode non invasive et non létales pour la détection des parasites exprimant la luciférase dans de nombreux tissus tout au long de chroniques<em> Leishmania</em> Spp. l'infection.

Abstract

Espèces distinctes de<em> Leishmania,</em> Un parasite protozoaire de la famille<em> Trypanosomatidae</em>, Causent généralement différentes manifestations de la maladie humaine. Les formes les plus courantes de maladie sont la leishmaniose viscérale (LV) et la leishmaniose cutanée (LC). Des modèles murins de la leishmaniose sont largement utilisés, mais la quantification des charges parasites lors de la maladie nécessite des souris murin d'être euthanasiés à différents moments après l'infection. Charges parasitaires sont ensuite mesurées soit par microscopie, en limitant la dilution d'essai, ou d'amplification PCR quantitative de l'ADN parasitaire. L'<em> In vivo</em> Système d'imagerie (IVIS) a un logiciel intégré qui permet la détection d'un signal bioluminescent associés à des cellules dans les organismes vivants. Tant pour minimiser l'utilisation d'animaux et de suivre l'infection longitudinalement dans les individus, dans des modèles in vivo pour l'imagerie<em> Leishmania</em> Spp. provoquant VL ou CL ont été établis. Les parasites ont été conçues pour exprimer la luciférase, et ces souris ont été introduites dans deux intradermique ou intraveineuse. Les mesures quantitatives de la bioluminescence de la luciférase de la conduite du transgénique<em> Leishmania</em> Parasites dans la souris ont été faites en utilisant IVIS. Souris individuelles peuvent être imagées à plusieurs reprises au cours des études longitudinales, nous permettant d'évaluer la variation inter-animal dans l'inoculum parasitaire expérimentale initiale, et d'évaluer la multiplication des parasites dans les tissus de la souris. Les parasites sont détectés avec une grande sensibilité dans les endroits cutanés. Bien qu'il soit très probable que le signal (photons / seconde / parasite) est plus faible dans les organes viscéraux profond que la peau, mais les comparaisons quantitatives des signaux dans superficielle par rapport sites profonds n'ont pas été faites. Il est possible que le nombre de parasites entre les sites de l'organisme ne peut pas être directement comparés, bien que la charge parasitaire dans les mêmes tissus peuvent être comparés entre les souris. Exemples d'une espèce visceralizing (<em> L. infantum chagasi</em>) Et une espèce causant la leishmaniose cutanée (<em> L. mexicana</em>) Sont affichés. La procédure IVIS peut être utilisé pour surveiller et analyser les modèles de petits animaux d'une grande variété de<em> Leishmania</em> Espèces causant des différentes formes de leishmaniose humaine.

Protocol

1. L'infection des animaux transgéniques petit Leishmania 1. Lignes parasites Transgéniques Leishmania spp. les parasites exprimant la luciférase sont générés en utilisant une épisomique ou un vecteur d'intégration tel que rapporté. 1 2 lignées clonales sont préférés. Deux points importants sont: (A) la luciférase intégré est préférable à la luciférase épisomale, puisque, en théori…

Discussion

Le système d'imagerie in vivo (IVIS) fournit une méthode pour l'imagerie des animaux entiers ou dans des modèles d'imagerie in vivo l'infection expérimentale de différentes formes de leishmaniose. 18,16 Le spp Leishmania. parasites peuvent être modifiées pour exprimer la luciférase de luciole à un niveau qui est détectée in vivo avec la technologie d'imagerie IVIS. Un des principaux avantages de cette méthode est qu'elle…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été financé en partie par une subvention d'examen du mérite du ministère des Anciens Combattants, par des subventions du NIH AI045540, AI067874, AI076233-01 et AI080801 (MEW), et par AI29646 (SMB). Le travail a été effectué en partie au cours de financement du CT et JG par le NIH T32 AI07511.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
D-Luciferin Potassium Salt Reagent Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) 122796  
IVIS Imaging System 200 Series Equipment Caliper LifeSciences   Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum.

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Cite This Article
Thalhofer, C. J., Graff, J. W., Love-Homan, L., Hickerson, S. M., Craft, N., Beverley, S. M., Wilson, M. E. In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host. J. Vis. Exp. (41), e1980, doi:10.3791/1980 (2010).

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