Summary

50パーセント溶血補体(CHの測定 50)活動

Published: March 29, 2010
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Summary

古典経路は、抗体によって活性化し、標的細胞の溶解で最高潮に達しますれる。 CH<sub> 50</sub>アッセイは、血清サンプルの補体活性の尺度を提供する。このビデオでは、CHを決定する際に必要な手順を示しています<sub> 50</sub>血清サンプルの、結果の計算と解釈する。

Abstract

補体系は、細胞溶解をターゲットにつながる活性化とopsonisationを通して食作用を促進するタンパク質のグループです。個々の補体成分は、しかし、これは経路の活性などの情報を提供しない定量することができる。 CH<sub> 50</sub>古典的補体経路(図1)の活性化のためのスクリーニングアッセイであり、経路の任意のコンポーネントの削減、不在および/または非アクティブに敏感です。 CH<sub> 50</sub>ウサギ抗ヒツジ赤血球抗体(溶血素)をプレコートヒツジ赤血球(SRBC)を溶解するために古典経路の血清補体成分の機能的能力をテストします。抗体でコーティングされたSRBCは試験血清、補体古典経路が活性化され、溶血の結果とインキュベートされている場合。補体成分が存在しない場合、CH<sub> 50</sub>レベルはゼロになります。古典経路の1つまたは複数のコンポーネントが減少している場合は、CH<sub> 50</sub>縮小されます。最適に感作されたSRBCの固定量は、各血清希釈に追加されます。インキュベーション後、混合物を遠心分離し、溶血の程度は540nmで上清中に放出されたヘモグロビンの吸光度を測定することによって定量される。補体活性の量は、抗体コーティングされたSRBCを溶解するために血清検査の種々の希釈物の容量を調べることによって決定されます。このビデオでは、古典的補体経路の補体活性のレベルを分析に関わる実験的な手順を説明します。

Protocol

5倍のベロナール緩衝生理食塩水の調製(VBS) ベロナール緩衝生理食塩水(VBS)を準備するには、3つの別々のソリューションが用意する必要があります。 蒸留水の350ミリリットルでナトリウムBarbitoneのNaClおよび0.94gmの21.25gmを溶解して溶液1を準備します。 NaClおよびナトリウムBarbitoneの最終濃度は、それぞれ1.02Mと13mmです。 熱い蒸留水の125​​ミリリットルでBarbitoneの1…

Discussion

CH 50アッセイは、多くの干渉の対象となります。いくつかのSRBCでの活動を補完する関係がない自発的な溶血の結果、他のものより壊れやすいものです。ウサギの抗体の親和性はロットし、1つのメーカーによって異なりますが、これはSRBCに結合する抗体の量に影響を与えます。また、抗体のコーティングの異なる量のSRBCによる細胞内で抗体の結果とSRBC感作のプロセス。検体採取と保…

Acknowledgements

著者は、映画撮影のためのテクニックと氏ポールシェパードを実行するためのミスローラマシューズに感謝したいと思います。このプロジェクトは、南オーストラリア大学、研究室医学のプログラムによって資金を供給された。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Sheep red blood cells   CSL 2490201 Use at 1% final
Serum       Human serum
Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated   AdB Serotec C12HSB  
96 well flat bottom plate   Sarstedt 83.1839  
Veronal buffered saline       Use at 1x final
Waterbath        
Plate reader        
37°C room/incubator        

References

  1. Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. . Immunology. , (2003).

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Cite This Article
Costabile, M. Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum. J. Vis. Exp. (37), e1923, doi:10.3791/1923 (2010).

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