Цель презентации является демонстрация высокой воспроизводимостью метод для создания матрицы связаны имплантатов стволовых клеток в дефектов хряща, которые могут быть визуализированы с МРТ. Стволовые клетки помечены FDA утвержденных Ferumoxides, смешанный с агарозы, внедренных в хряще дефектов и полученную с использованием сканера 7T MR.
Abstract
Области тканевой инженерии интегрирует принципы инженерии, клеточной биологии и медицины по отношению к регенерации специфических клеток и функциональной ткани. Матрица связанных стволовых клеток имплантаты (MASI) направлены к регенерации хряща дефекты, связанные с артритом или травматического травмы суставов. Взрослых мезенхимальных стволовых клеток (МСК), были способны дифференцироваться в клетки хондрогенного линии и показали многообещающие результаты в клеточной суставного хряща технологии ремонта. Аутологичных МСК может быть выделен из различных тканей, может быть расширен в клеточных культурах, не теряя их дифференциации потенциал, и продемонстрировали хондрогенного дифференциации в пробирке и в естественных условиях1, 2.
В целях обеспечения местного удержания и жизнеспособности пересаженных МСК в дефектов хряща, строительные леса необходимы, который также поддерживает последующей дифференциации и пролиферации. Архитектура ткани формирование эшафот руководства и разрешений внеклеточного матрикса, производства стволовых клеток, расширяться. Предыдущие исследования показали, что 2% агарозном леса может поддержать развитие стабильных гиалиновых хрящей и не вызывать иммунный ответ 3.
Долгосрочное сохранение пересаженные стволовые клетки в MASI имеет решающее значение для регенерации хряща. Маркировка МСК с наночастицами оксида железа обеспечивает долгосрочный в естественных условиях слежения с неинвазивных методов визуализации МР 4.
Эта презентация будет демонстрировать методы маркировки МСК с наночастицами оксида железа, поколению клеточных агарозном конструкций и имплантации эти конструкции в хряще дефектов. Помечены конструкции могут быть отслежены неинвазивно с МР-изображений.
Protocol
1. Маркировка hMSCs с Endorem Клетки выращивают до 80% слияния по крайней мере за 18 часов до маркировки. За это время, маркировка СМИ получают путем добавления Endorem к образцу в дозе 100 мкг Fe / мл сыворотки среде. После клетки выращивают до слияния, питательных сред отсасывают и кле?…
Discussion
Описанные протокол обеспечивает воспроизводимые способ этикетке МСК с наночастицами оксида железа и внедрить эти меченых МСК на дефекты хряща. Эта техника позволяет неинвазивным изображением трансплантации стволовых клеток в дефектов хряща с МРТ, которая позволяет раннего выявлени…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантом Национального института артрита и костно-мышечной заболевания кожи, NIH RO1AR054458.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
D-MEM High Glucose
Reagent
Sigma
D5648
PBS (Ca++, Mg++ free)
GIBCO
14190-144
Trypsin-EDTA 0.05%
Invitrogen
25399-120
FBS
Hyclone
SH30071.03
Penicillin/Streptomycin
GIBCO
15140-122
Ferumoxides (Endorem)
Guerbet
Agarose Typ VII
Sigma
A9045
Dilute Agarose in PBS to final concentration of 4%
Nedopil, A. J., Mandrussow, L. G., Daldrup-Link, H. E. Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects. J. Vis. Exp. (38), e1793, doi:10.3791/1793 (2010).