الهدف من العرض هو لاظهار طريقة استنساخه للغاية لتوليد مصفوفة الخلايا الجذعية يزرع في العيوب المرتبطة الغضروف ، والتي يمكن تصور مع التصوير بالرنين المغناطيسي. وصفت الخلايا الجذعية مع ادارة الاغذية والعقاقير التي وافق عليها Ferumoxides ، مختلطة مع agarose ، مزروع في عيوب الغضروف وتصويرها مع ماسح ضوئي 7T MR.
Abstract
مجال هندسة الأنسجة يدمج مبادئ علم الأحياء الهندسة الخلية ، والدواء نحو تجديد الخلايا والأنسجة وظيفية محددة. مصفوفة زرع الخلايا الجذعية المرتبطة به (مازي) تهدف إلى تجديد عيوب الغضروف بسبب الاصابة بالتهاب المفاصل المشتركة أو الصدمة. الكبار الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCS) لديها القدرة على التمايز إلى خلايا النسب مكون للغضروف وأظهرت نتائج واعدة لخلية تكنولوجيات إصلاح الغضروف المفصلي. ويمكن توسيع نطاق ذاتي يمكن عزل اللجان الدائمة من مجموعة متنوعة من الأنسجة ، في ثقافات الخلية دون أن تفقد قدرتها التمايز ، وبرهنت تمايز مكون للغضروف في المختبر والمجراة في1 و 2.
من أجل توفير الاحتفاظ المحلية وصلاحية اللجان الدائمة زرع غضروف في العيوب ، لا بد من السقالة ، والذي يدعم أيضا تمايز اللاحقة والانتشار. بنية النسيج سقالة تشكيل دلائل وتصاريح المصفوفة خارج الخلية ، التي تنتجها الخلايا الجذعية ، للتوسع. وقد أظهرت التحقيقات السابقة بأن 2 ٪ agarose سقالة قد دعم تنمية مستقرة وغضروف زجاجي لا تحفز الاستجابات المناعية 3.
الاحتفاظ على المدى الطويل من الخلايا الجذعية المزروعة في مازي أمر حاسم بالنسبة لتجديد الغضاريف. وسم اللجان الدائمة مع جزيئات أكسيد الحديد يسمح على المدى الطويل في تتبع المجراة مع المنظمات غير الغازية تقنيات التصوير بالرنين المغناطيسي 4.
وهذا العرض شرح التقنيات لوضع العلامات اللجان الدائمة مع جزيئات أكسيد الحديد ، وتوليد خلايا agarose يبني وغرس هذه التركيبات في عيوب الغضروف. ويمكن تتبع يبني المسمى غير جراحية مع MR – التصوير.
Protocol
1. وسم hMSCs مع Endorem تزرع الخلايا لالتقاء 80 ٪ على الأقل 18 ساعة قبل وضع العلامات. خلال هذا الوقت ، على استعداد وسائل الاعلام الوسم بإضافة Endorem إلى نموذج بجرعة 100 ميكروغرام الحديد / مل مصل خالية من و?…
Discussion
وصف بروتوكول يوفر وسيلة لتسمية اللجان الدائمة للتكرار مع جزيئات أكسيد الحديد وزرع هذه اللجان الدائمة في المسمى عيوب الغضروف. هذا الأسلوب يسمح غير الغازية تصوير زرع الخلايا الجذعية في عيوب الغضروف مع التصوير بالرنين المغناطيسي ، والذي يسمح للكشف المبكر عن الفشل ماز?…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من خلال منحة من المعهد الوطني لالتهاب المفاصل والأمراض الجلدية العظام والعضلات ، NIH RO1AR054458.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
D-MEM High Glucose
Reagent
Sigma
D5648
PBS (Ca++, Mg++ free)
GIBCO
14190-144
Trypsin-EDTA 0.05%
Invitrogen
25399-120
FBS
Hyclone
SH30071.03
Penicillin/Streptomycin
GIBCO
15140-122
Ferumoxides (Endorem)
Guerbet
Agarose Typ VII
Sigma
A9045
Dilute Agarose in PBS to final concentration of 4%
Nedopil, A. J., Mandrussow, L. G., Daldrup-Link, H. E. Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects. J. Vis. Exp. (38), e1793, doi:10.3791/1793 (2010).