Bu protokol, chemoeffectors istikrarlı konsantrasyon gradyanlar bakteriyel kemotaksis soruşturma için bir mikroakışkan aygıt geliştirme açıklar.
Abstract
Kemotaksis bakteri cezbedici kimyasalların kaynakları yaklaşım veya itici kimyasalların kaynakları önlemek için izin verir. Bakteriler sürekli akım konsantrasyonunu konsantrasyonu ile karşılaştırarak özel chemoeffectors konsantrasyonu monitör daha önce birkaç saniye tespit. Bu karşılaştırma, net hareketin yönünü belirler. Birden fazla, rekabet gradyanlar genellikle doğada bir arada olmasına rağmen, bakteriyel kemotaksis araştırmak için geleneksel yaklaşımlar cezbedicilerde ve kovucular konsantrasyonu gradyanlar yanıt göç ölçülmesi için optimal. Burada, bakterilere karşı hassas ve kararlı chemoeffectors konsantrasyon gradyanlar sunulması ve nicel olarak uygulanan degrade tepki soruşturma mikroakışkan kemotaksis model geliştirme açıklar. Cihaz istenen herhangi bir mutlak konsantrasyon ve degrade gücü bu konsantrasyon gradyanlar çok yönlü kolayca uzadıya karıştırılması ile oluşturulabilir. Cihaz yanıtı ile gösterilmiştir<em> Escherichia coli</em> RP437 amino asitler ve nikel iyonları degradeler.
Protocol
1. Standart SU-8 fotolitografi 1 (Bu video görünmez) kullanılarak silikon ustaların Fabrikasyon. Mikroakışkan ağ ve kemotaksis odasına içeren PDMS kalıp imalatı için SU-8 "master" (SÜ-8 2025, MicroChem, Newton, MA) oluşturmak için standart SU-8 fotolitografi yöntemleri kullanın. Böyle bir ana kalıp herhangi bir mikroimalat tesisi (örneğin, Stanford Mikroakiskan Döküm http://thebigone.stanford.edu/foundry/…
Discussion
Kemotaksis bölüm katsayısı (TBM) ve kemotaksis göç katsayısı (CMC), Mao veark 5 açıklandığı gibi hesaplanır . Düşük konsantrasyonda tarafında tespit edilen bir hücre -1 değeri verilir ise, yüksek konsantrasyon tarafına bir hücre tespit edilirse, 1 değeri verilir. Değerleri toplanır ve toplam hücre sayısına göre TBM oluşturmak için ayrılmıştır. TBM (pozitif ya da negatif) işareti göç yönü (bir sinyal doğru veya uzak) verir. TBM hücreleri ya da cezbedici bir…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı (CBET 0.846.453) tarafından kısmen desteklenmiştir.
Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients. J. Vis. Exp. (38), e1779, doi:10.3791/1779 (2010).