פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח של המכשיר microfluidic לחקירת chemotaxis חיידקים הדרגתיים ריכוז יציב של chemoeffectors.
Abstract
Chemotaxis מאפשרת לחיידקים להתקרב למקורות של כימיקלים attractant או להימנע ממקורות של כימיקלים דוחה. חיידקים מנטרים את הריכוז של chemoeffectors ספציפי על ידי השוואת הריכוז הנוכחי לריכוז זיהה כמה שניות קודם לכן. השוואה זו קובעת את כיוון נטו של התנועה. למרות מרובים, הדרגתיים מתחרים לעתים קרובות להתקיים בטבע, גישות קונבנציונליות על חקירת chemotaxis חיידקים הם לא טובים לכימות הגירה בתגובה הדרגתיים ריכוז ו דוחי משיכה. כאן אנו מתארים את הפיתוח של מודל chemotaxis microfluidic להצגת הדרגתיים ריכוז מדויק ויציב של chemoeffectors כדי חיידקים כמותית בחקירת תגובתם הדרגתי שהוחל. המכשיר הוא צדדי כי הדרגתיים ריכוז של כל ריכוז מוחלט הרצוי כוח הדרגתי יכול להיווצר בקלות על ידי ערבוב diffusive. המכשיר הוא הוכיח באמצעות תגובת<em> Escherichia coli</em> RP437 הדרגתיים של חומצות אמינו ויונים ניקל.
Protocol
1. המצאה של אדונים סיליקון באמצעות photolithography סטנדרטי SU-8 1 (לא רואים בסרט הזה). השתמש תקן SU-8 שיטות photolithography ליצור SU-8 "אמן" (SU-8 2025, MicroChem, ניוטון, MA) בודה את התבנית PDMS המכיל את רשת microfluidic קאמרית chemotaxis. תבניות הו?…
Discussion
מקדם החלוקה chemotaxis (CPC) ואת מקדם ההגירה chemotaxis (CMC) יכול להיות מחושב כפי שמתואר מאו ואח'5. אם תא מזוהה בצד ריכוז גבוה, הוא מקבל ערך של 1, ואילו תא זוהה בצד ריכוז נמוך ניתנת ערך של -1. הערכים סיכם ואמר מחולק במספר הכולל של תאים כדי להפיק את העלות. הסימן של עלות לקלי?…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי הקרן הלאומית למדע (CBET 0,846,453).
Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients. J. Vis. Exp. (38), e1779, doi:10.3791/1779 (2010).