סרט הווידאו הזה מדגים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. נוירונים commissural ניתק מועילים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון והדרכה.
נוירונים Commissural היה בשימוש נרחב כדי לחקור את המנגנונים הדרכה האקסון במהלך ההתפתחות העוברית חוט השדרה. גופי התא של הנוירונים האלה נמצאים בעמוד השדרה הגבי ו האקסונים שלהם לעקוב אחר מסלולי סטריאוטיפית במהלך ההתפתחות העוברית. אקסונים Commissural בתחילה הפרויקט ventrally כלפי floorplate. לאחר חציית קו האמצע, אקסונים אלה להפוך anteriorly הפרויקט לכיוון המוח. כל אחד משלבים אלה מוסדר על ידי פעולה של אותות הדרכה מספר. תרבויות מועשר בנוירונים commissural מתאימות בצורה אידיאלית עבור ניסויים רבים בהתמודדות עם מנגנוני pathfinding האקסון, כולל מבחני מפנה, immunochemistry וביוכימיה. כאן אנו מתארים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. ראשית, חוט השדרה מופרד רצועות הגב הם גזור החוצה. הרקמה הגב אז הוא ניתק את ההשעיה על ידי תא trypsinization והפרעה מכאנית. נוירונים הם מצופה על פולי-L-ליזין coverslips מצופים זכוכית או רקמות תרבות הכלים. לאחר 30 שעות<em> במבחנה</em> רוב הנוירונים הרחיבו האקסון. טוהר התרבות (ים<em> Et al.</em> 2009), בדרך כלל מעל 90%, ניתן להעריך על ידי immunolabeling עם DCC נוירון סמנים commissural, LH2 ו TAG1 (הלמס וג'ונסון, 1998). זו הכנה העצבית הוא כלי שימושי עבור<em> במבחנה</em> מחקרים של המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון הדרכה commissural ובמהלך התפתחות חוט השדרה.
תיארנו שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה עכברוש עובריים. הליך זה נעשה שימוש שגרתי במעבדה שלנו באופן מהימן להכין נוירונים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של הדרכה האקסון. עבור ביולוגיה של התא וניסויים immunochemistry, דיסקציה של פסולת מהן מניבה מספיק נוירונ…
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הקנדי לבריאות מחקר (CIHR), את פיטר Lougheed למחקר רפואי הקרן, תוכנית מקגיל ב Neuroengineering, Fonds דה משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ), וכן קרן קנדה עבור חדשנות (CFI ). סבסטיאן ד Langlois נתמך על ידי פרס הדרכה מוסמך של Fonds de la משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ) ועל ידי פרדריק בנטינג וצ'רלס בסט פרס קנדה מלגות לתואר שני מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). אנחנו אסירי תודה על ג'סיקה MT פאם לסיוע עם דמויות.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Neurobasal medium, liquid | Invitrogen | 21103-049 | See Recipes and Comments | |
B27 supplement 50X | Invitrogen | 17504 | See Recipes and Comments | |
Poly-L-lysine 0.01% solution | Sigma | P4707 | ||
L-15 medium, powder | Invitrogen | 41300-070 | ||
Trypsin 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090-046 | ||
DNAse I, 25000 U/mL | Worthington | |||
MgSO4 | Sigma | M2643 | ||
HBSS, Ca2+/Mg2+-free | Invitrogen | 14170-112 | ||
L-glutamine 200mM, liquid | Invitrogen | 25030-081 | See Recipes and Comments |
Dissection of embryonic rat dorsal spinal cord (see also Table I)
Commissural neuron culture (see also Table I)