Мы описываем обтекаемый протокол для создания "филе" препараты эмбрионов дрозофилы конкретных генотипов. Этот протокол позволяет эффективного выполнения различных генетических экранов. Она также позволяет отличную визуализацию структур в конце эмбриона.
Abstract
Дрозофилы эмбрионов между этапами 14 и 17 эмбрионального развития может быть легко расчлененный для создания "филе" препаратов. В этих препаратов, центральная нервная система работает по середине, и в окружении теле стены. Многие различные фенотипы были изучены с помощью таких препаратов. В большинстве случаев, филе были получены путем рассечения антител окрашенных фиксированных целом монтажа эмбрионов. Эти «фиксированные вскрытия" есть некоторые недостатки. Они отнимают много времени для выполнения, а это трудно разобраться мутант (GFP-отрицательный) эмбрионы от акций, в которых мутации хромосом сохраняется в течение GFP балансировки. С 2002 года наша группа ведет дефицит и внематочной экраны выражение для идентификации лигандов для детей-сирот рецепторов. Для того, чтобы сделать это, мы разработали обтекаемый протоколов для живых рассечение эмбриона и антител окрашивание коллекций, содержащих сотни симметричные линии. Мы пришли к выводу, что это значительно более эффективным для изучения фенотипов в больших коллекций запасы живой рассечение, чем фиксированной рассечение. Использование протокола, описанные здесь, один обученный человек может экрана до 10 строк в день в течение фенотипы, рассматривая 4-7 мутантных эмбрионов из каждой строки под соединение микроскопа. Это позволяет идентифицировать мутации присвоении тонкие, низко-фенотипы пенетрантностью, так как до 70 hemisegments в строке засчитываются при большом увеличении с 40X воды погружения линз.
Protocol
Введение Дрозофилы эмбрионов между этапами 14 и 17 эмбрионального развития может быть легко расчлененный для создания "филе" препаратов. В этих препаратов, центральной нервной системы (ЦНС) проходит по середине, и в окружении теле стены. Кишка удаляется. При окрас…
Discussion
Мы надеемся, что это видео демонстрация показала наши методы для живых рассечение эмбриона и окрашивания достаточно подробно, что теперь они могут быть легко выполнен любым лицом, которое имеет некоторый опыт дрозофилы генетики и эмбриологии. Конечно, значительную практику все е?…
Acknowledgements
Мы благодарим Ники Фокс и Алоизия Шмид за их вклад в развитие этих протоколов. Эта работа была поддержана NIH RO1 предоставить KZ, NS28182.
Lee, H. (., Wright, A. P., Zinn, K. Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining. J. Vis. Exp. (34), e1647, doi:10.3791/1647 (2009).