Implantación de la ingeniería tisular en el corazón de rata

Summary

Aquí se describe un procedimiento de cirugía cardiaca para implantar la ingeniería tisular en el auriculoventricular (AV) con ranura de un adulto de rata Lewis.

Abstract

La cirugía de roedores es a menudo un componente importante en la evaluación de la utilidad de los tejidos de ingeniería. Una amplia variedad de procedimientos quirúrgicos pueden ser realizados en ratas o ratones de laboratorio común y estas muy a menudo sirven como un paso intermedio entre el de sobremesa experimentos y pruebas con animales grandes o los ensayos en humanos. Teniendo en cuenta que los roedores disponer de un sistema modelo establecido, rentable, y fisiológicamente relevantes en los que probar nuevas combinaciones de materiales del armazón y las células, que son especialmente adecuados para los estudios de ingeniería de tejidos cardiovasculares. En la actualidad, se describe un procedimiento quirúrgico de corazón abierto para la implantación de la ingeniería tisular con células miogénicas progenitoras en el auriculoventricular (AV) ranura de un corazón de rata. Estos implantes tienen la intención de crear un conducto eléctrico entre la aurícula y el ventrículo derecho, con el objetivo último de proporcionar un tratamiento alternativo a la implantación de un marcapasos convencional en pacientes pediátricos con bloqueo cardíaco completo [1]. La ingeniería tisular se implanta en la AV-surco por medio de una toracotomía. Para nuestros propósitos, las ratas Lewis son anestesiados y ventilados invasiva para mantener la presión positiva de aire durante el procedimiento quirúrgico estéril. El enfoque hacia el corazón se realiza una toracotomía derecha a través de una incisión antero-lateral en el 5^° Espacio intercostal. La construcción de tejido se fija en el surco AV con una sola sutura de Prolene 7-0 y se coloca entre el ventrículo derecho y el atrio en la parte ventral del corazón. El epicardio es parcialmente removido para permitir el contacto directo entre las células receptoras de miocardio y los contenidos en la ingeniería tisular. Tras el implante, la pared torácica se cierra por planos, cualquier neumotórax es evacuado, y el animal es extubado y se tratan con analgésicos.

Protocol

Parte 1: La inducción de la anestesia general A 200-250 g de ratas Lewis es anestesiados con 50 mg / kg de ketamina y 4 mg / kg de xilazina inyecta con una aguja de 30 G en la cavidad intraperitoneal. La parte superior del abdomen y el pecho derecho se recorta para eliminar el vello y la zona de la incisión limpiado a fondo con el 70% de etanol y una solución de yodo-povidona antiséptico tópico. El animal está intubado por vía endotraqueal utilizando un catéter de 16 G por vía intravenosa c…

Discussion

Para obtener un resultado favorable a la intervención quirúrgica, es fundamental para intubar correctamente y invasiva ventilar el animal. Si la rata es simplemente sedado para permitir que respire de forma espontánea, los dos pulmones se derrumbará inevitablemente, mientras que el tórax se abre debido a la pleura común en roedores. Antes de cerrar el pecho, cualquier neumotórax debe ser eliminado por completo y los pulmones totalmente expandida para reducir la atelectasia. De lo contrario, el destete del respira…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
7×4 Thermo Pad 4/box	Equipment	Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada	MODEL 704R
Inspira ASV Ventilator	Equipment	Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA
Handheld Pulse Oximeter	Equipment	Nellcor, Boulder, CO 80301 USA	N20PA
Retractor	Equipment	Roboz, Gaithersburg, MD 20898 USA	RS-6514
Isoflurane (Forane)	Reagent	Baxter	1001936040
Ketamine HCl	Reagent	HOSPIRA Inc., Lake Forest, IL 60045	RL-0065
Xylazine (AnaSed)	Reagent	Lloyd	LB15705A
Buprenorphine HCL Inject	Reagent	Bedford Labs, Bedford, OH 44146 USA	Div-BUP-P00
Bupivacaine 0.25%	Reagent	HOSPIRA Inc., Lake Forest, IL 60045