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Detecção Simples e Rápida de Amplificação por Círculo de Rolamento da Atividade da Topoisomerase 1 em Amostras Biológicas Brutas
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Chapters
- 00:04Introduction
- 00:51Preparation of Functionalized Slides
- 01:34Generation of Closed Circular Substrates
- 02:16Blocking of the Wellmaker and Hybridization of the Circles
- 03:48Rolling Circle Amplification (RCA) and Visualization by Fluorescence Microscopy
- 05:54Coupling of HRP-Conjugated Antibody to Rolling Circle Products and Visualization
- 07:57Results: Detection of Topoisomerase 1 Activity Using the REEAD Assay
- 09:29Conclusion
Um protocolo para a detecção sensível e quantitativa da atividade da topoisomerase 1 usando o ensaio de detecção de atividade enzimática aprimorada do círculo rolante é descrito. O método permite a detecção da atividade da topoisomerase 1 a partir de componentes purificados ou extratos celulares/teciduais. Este protocolo tem amplas aplicações em qualquer campo que envolva a detecção de atividade enzimática.
