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Detection of RNA-binding Proteins by In Vitro RNA Pull-down in Adipocyte Culture

Detecção de proteínas de ligação a ARN pela<em> In Vitro</em> RNA Pull-down em Cultura adipócito

DOI:
10.3791/54207-v

•

10:34 min

•

July 22, 2016

•

, , ,
1Cardiovascular and Metabolic Disorders Program,Duke-NUS Medical School, 2Institute of Molecular and Cell Biology, Singapore, 3Division of Bioengineering, School of Chemical & Biomedical Engineering,Nanyang Technological University

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:35Preparation of Biotin-labeled RNA
  • 02:18Preparation of RNA-conjugated Beads
  • 04:16Preparation of Cellular Lysate from Primary Adipocytes
  • 07:00Binding and Elution of RBP
  • 08:45Results: RNA Pull-down Assay
  • 10:05Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Um protocolo de pull-down ARN é optimizado aqui para a detecção de interacções entre proteínas de ligação a ARN (RBPs) e não-codificante, bem como ARN de codificação. Um fragmento de ARN a partir do receptor de androgénio (AR) foi usado como um exemplo para demonstrar como recuperar a sua RBP de lystate de adipócitos primários castanhos.

Tags

RNA-binding ProteinsRNA Pull-downAdipocyte CultureAntigen Receptor 3-Prime Untranslated Region (AR 3-Prime UTR)Biotinylated RNAIn Vitro TranscriptionStreptavidin-coated Magnetic BeadsRNA Structure BufferRNA-protein InteractionsRNA Regulatory MechanismsLong Non-coding RNA

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