Più della metà delle proteine sono piccole proteine (massa molecolare <200 kDa) che stanno sfidando per entrambi microscopio elettronico di immagini e ricostruzioni tridimensionali. Ottimizzato colorazione negativa è un protocollo robusto e high-throughput per ottenere un elevato contrasto e immagini di piccole proteine o complessi asimmetrici in diverse condizioni fisiologiche relativamente alta risoluzione (~ 1 nm).