A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
- 03:54Culturing and Sonication
- 05:26Affinity Purification
- 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
- 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
- 11:02Results
- 14:27Conclusion
Affinity очистки меченых белков в сочетании с масс-спектрометрии (ППМ) является мощным методом для систематического отображения сети взаимодействия белка и для исследования механистической основе биологических процессов. Здесь мы описываем оптимизированный последовательных пептидов близости (SPA) ППМ процедуры, разработанные для бактерии<em> Кишечной палочки</em>, Который может быть использован для выделения и характеризуют стабильное мульти-белковых комплексов почти до однородности, даже начиная с низким числом копий на клетку.
Tags
Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus
