Presentazione dell'antigene in organi linfatici secondari da parte delle cellule dendritiche è cruciale per l'avvio della cellula T mediata risposta immunitaria adattativa. Qui mostriamo la cultura del midollo osseo derivate le cellule dendritiche murine, di attivazione e di etichettatura per 2-fotoni imaging.
Diversi metodi per la preparazione di cellule dendritiche murine possono essere trovati in letteratura. Qui, vi presentiamo un metodo che produce più del 85% CD11c cellule dendritiche in alta cultura che ospita il linfonodo drenante dopo iniezione sottocutanea e antigene presente a cellule T antigene specifico (vedi video). Inoltre, utilizziamo strumenti Essen Incucyte per monitorare la maturazione delle cellule dendritiche, dove, al giorno 10, la morfologia delle cellule in coltura è tipico di una cellula matura dendritiche e <85% delle cellule sono CD11chigh. Lo studio di presentazione dell'antigene nei linfonodi periferici da 2-fotone di imaging ha rivelato che ci sono tre fasi distinte di cellule dendritiche e l'interazione delle cellule T 1, 2. Fase I è costituito da brevi contatti seriale tra altamente mobili cellule T antigene specifico antigene e portando le cellule dendritiche 1, 2. La fase due è segnato da contatto prolungato tra antigene-specifica delle cellule T antigene e cuscinetti cellule dendritiche 1, 2. Infine, di fase III è caratterizzata da cellule T distacco dalle cellule dendritiche, recuperare la motilità e l'inizio di dividere 1, 2. Questo è un esempio del tipo di antigene-specifiche interazioni che possono essere analizzati da due fotoni di imaging di antigene-caricati celle dye-inseguitore etichettati cellule dendritiche.
Le cellule dendritiche sono mediatori chiave della risposta immunitaria e la cellula che presenta l'antigene più efficiente caratterizzato fino ad oggi. Metodi per l'uomo e topo di cellule dendritiche cultura in letteratura si differenziano per il tipo di citochine usato per influenzare lo sviluppo di diversi tipi di cellule dendritiche. In particolare, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa e IFN-gamma sono utilizzati in diverse combinazioni per produrre maturo, immaturo, infiammatorie e lo stato stazionario come il midollo osseo muri…
National Institutes of comunione Salute Kirchstein Fellowship predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (PI)