Uma determinação de dissolução in vitro de componentes multiíndices em grânulos de Rhodiola da medicina tibetana

Summary

Aqui, testamos a dissolução de grânulos de Rhodiola (RG) in vitro, desenhamos curvas de dissolução de salidrósido, ácido gálico e galato de etila em água ultrapura e ajustamos as curvas a diferentes modelos matemáticos. Este protocolo fornece informações e orientações para estudos de bioequivalência in vivo e de correlação in vivo-in vitro do GP.

Abstract

A composição do medicamento tibetano Rhodiola granules (RG) é complexa, e a qualidade geral do RG é difícil de determinar. Portanto, estabelecer um método para determinar a dissolução multicomponente in vitro do RG é de grande importância para o controle de qualidade. Este estudo utiliza o método do segundo remo da quarta regra geral 0931 da Farmacopeia Chinesa (edição 2020), compatível com o aparelho 2 da Farmacopeia dos Estados Unidos (USP). O aparelho de dissolução foi ajustado para uma velocidade de rotação de 100 rpm com água ultrapura como meio de dissolução. Um volume de amostra de 1 mL foi coletado em cada ponto de tempo. Além disso, a dissolução cumulativa de ácido gálico, salidrosídeo e ácido etílico-gálico em RG em diferentes momentos foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Finalmente, as curvas de dissolução foram desenhadas, e as curvas foram ajustadas às equações de GompertzMod, Gompertz, Logística e Weibull. Os resultados mostraram que a dissolução cumulativa do ácido gálico no GP foi superior a 80% em 1 min, a dissolução cumulativa de salidrósida e ácido etílico-gálico foi superior a 65% em 5 min e a dissolução cumulativa de cada componente do índice diminuiu após 30 min. O ajuste da curva demonstrou que a equação de GompertzMod foi o modelo de melhor ajuste para cada componente do índice do GP. Em conclusão, o método de teste de dissolução descrito neste protocolo é simples, preciso e confiável. Pode caracterizar o comportamento de dissolução dos componentes do índice no GP in vitro, o que fornece um referencial metodológico para o controle de qualidade do GP e avaliação da qualidade de outros compostos étnicos.

Introduction

Na China, a prevalência de doenças cardiovasculares continua a aumentar, e as taxas de morbidade e mortalidade de doenças cardiovasculares ocupam o primeiro lugar entre os residentes chineses¹. A angina de peito da doença coronariana é causada por estenose luminal devido à aterosclerose coronariana, o que leva a suprimento sanguíneo coronariano relativamente insuficiente e isquemia miocárdica e hipóxia². Nos últimos anos, o efeito curativo da medicina tradicional chinesa no tratamento da doença coronariana tem sido reconhecido por muitos médicos³.

A medicina tradicional chinesa desempenha um papel importante no alívio dos sintomas clínicos e na melhoria da qualidade de vida dos pacientes⁴. Os grânulos de Rhodiola (RG) são extraídos e refinados da planta medicinal do planalto tibetano Rhodiola rosea L. Os principais componentes do RG são salidrosídeo, rodiosina e flavonoides ^5,6. RG tem o efeito de suplementar Qi⁷ e ativar e promover a circulação sanguínea para aliviar a dor. Clinicamente, é usado para tratar obstruções torácicas causadas por deficiência de Qi e estase sanguínea, doença coronariana, angina de peito⁸. A determinação do conteúdo por si só não reflete totalmente a qualidade intrínseca dos fármacos, pois tanto a desintegração quanto a dissolução in vitro podem afetar a biodisponibilidade e a eficácia dos fármacos ^9,10. Os métodos de inspeção para a dissolução da medicina chinesa incluem o método da cesta rotativa, o método da pá e o método do copo pequeno. A desvantagem do método da cesta rotativa é que apenas a parte externa da cesta rotativa entra em contato com o meio de dissolução durante a rotação, o que não reflete o comportamento de dissolução do mundo real. O método do remo pode superar a deficiência acima, o que o torna mais adequado do que o método da cesta para algumas preparações sólidas da medicina chinesa¹¹. Atualmente, não há relato sobre a análise de dissolução in vitro do RG. A fim de controlar a qualidade do GP de forma mais abrangente, investigou-se o comportamento de dissolução dos três componentes do índice (ácido gálico, salidrosídeo e galato de etila) no GP. Este estudo fornece dados para o controle de qualidade do GP e um referencial metodológico para avaliação da qualidade de outras preparações de compostos étnicos.

Protocol

1. Preparação da solução Preparar a solução-mãe da substância de referência: Pesar 10,6 mg de salidrósido, 5,24 mg de ácido gálico e 5,21 mg de ácido etílico-gálico separadamente numa balança analítica electrónica e adicioná-los individualmente num balão aferido de 5 ml. Em seguida, adicione metanol de grau HPLC para dissolver e diluir para 5 mL. Finalmente, agitar bem para obter a solução-estoque da substância de referência com concentrações mássicas de 2,120 mg/mL, …

Representative Results

Neste estudo, a precisão, a estabilidade, a repetibilidade e a recuperação amostral do GP estavam dentro da faixa metodológica especificada na Farmacopeia Chinesa (Volume 4, 2020)12, indicando que o método era viável. Após depuração repetida, determinou-se que o gradiente de eluição utilizado neste estudo apresentou boa resolução (Figura 1) para os três componentes do índice no GP. Os três componentes do índice no GP apresentaram boa relação linear …

Discussion

O teste de dissolução é um método in vitro ideal para simular a desintegração e dissolução de preparações orais sólidas no trato gastrointestinal¹⁵. É um índice importante para avaliar e controlar a qualidade de preparações orais sólidas. Portanto, o teste de dissolução desempenha um papel essencial no desenvolvimento de preparações orais de drogas sólidas¹⁶. Em particular, com o desenvolvimento da tecnologia de controle de qualidade da medicin…

Materials

Chromatographic column	ZORBAX Eclipse	XDB-C18	4.6 mm x 250 mm, 5 µm
Drug dissolution tester	Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.	RCZ-6B3
Electronic analytical balance	Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.	FA1004
Ethyl gallate (HPLC, ≥98%)	Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.	DSTDM006301
Function drawing software	OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA	2022
Gallic acid (HPLC, ≥98%)	Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.	DSTDM000802
High performance liquid chromatography	Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.	Agilent 1260 Infinity
HPLC grade methanol	Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.	216565
Injector	Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instrument Co., Ltd.	0.7 (22 G)
Millipore filter	Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd	φ13 0.22 Nylon66
Rhodiola granules	Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.	210501
Salidroside (HPLC, ≥98%)	Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.	DST200425-037
Ultra pure water systemic	Merck Millipore Ltd.	Milli-Q
Ultrasonic cleansing machine	Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd	SB-8200 DTS