Summary

フロー強化超音波による眼の深部血管イメージング

Published: October 04, 2021
doi:

Summary

我々は、造影剤を使用せずに眼内に3次元血管造影を生成するための非侵襲的超音波技術を提示する。

Abstract

眼内の網膜は、体内で最もエネルギーを要求する組織の1つであり、したがって、豊富な血液供給からの酸素送達の高い速度を必要とする。脈絡膜の毛細血管薄層は網膜の外表面に並び、ほとんどの脊椎動物の網膜で支配的な酸素源です。しかし、この血管床は、光吸収性の高い網膜の背後に位置しているため、従来の光学技術では画像化が困難です。ここでは、眼の深部血管床(0.5〜3cm)を高い時空間分解能で画像化するための、その後の流れ増強を伴う高周波超音波技術について説明する。この非侵襲的方法は、有核赤血球を有する種(非哺乳動物および胎児動物モデル)において良好に機能する。造影剤を使用せずに非侵襲的な3次元血管造影の生成を可能にし、ドップラーベースの超音波イメージング技術よりも高感度で血流角度に依存しない。

Introduction

脊椎動物の網膜上の高い代謝は、2つの対照的なニーズの間に固有のトレードオフを課す。高い血流量と血管のない光路。赤血球の灌流の視覚的障害を避けるために、すべての脊椎動物の網膜は、光受容体の後ろの毛細血管のシートを介して酸素と栄養素を受け取ります1,2,3しかし、この栄養素と酸素の単一の供給源は網膜の厚さに拡散制限を課す4,5ので、多くの視覚的に活性な種は、この代謝的に活性な器官に追加の血液供給を提供するために、様々な精巧な血管網を有する6。これらの血管床には、哺乳類および一部の魚類の網膜層を灌流する血管4、789、10、多くの魚類、爬虫類、および鳥類に見られる網膜の内側(光向き)側の血管411、1213、および魚類脈絡膜の向流血管配置脈絡膜reteミラビレは、超大気酸素分圧14、15、1617181920の生成を可能にする。網膜栄養供給のためのこれらの追加の非脈絡膜経路は、優れた視力の代謝要求に燃料を供給する上で不可欠な役割を果たすにもかかわらず4、これらの血管構造の三次元解剖学は十分に理解されておらず、脊椎動物の眼の形態学的進化に関する我々の理解を制限する。

伝統的に、網膜血液供給は、眼底眼科検査などの光学的技術を用いて研究されてきた。このカテゴリーの技術は、非脈絡膜血管解剖学に関するハイスループットの非破壊的情報を高解像度で提供し21、したがって網膜血管構造の異常の臨床診断に容易に使用される22。しかしながら、網膜色素上皮は透過光を吸収し、これらの光学技術における視野の深さを制限し、造影剤21を使用せずに脈絡膜構造および機能に関する減少した情報を提供する。同様の深さの制限は、光干渉断層撮影法(OCT)でも経験される。この技術は、深度透過の技術的犠牲を払って光波を用いて高解像度眼底血管造影を生成することができ23、一方、強化された深度イメージングOCTは、網膜イメージング品質を犠牲にして脈絡膜を視覚化することができる24。磁気共鳴イメージングは、眼科検査とOCTの光学的限界を克服し、低解像度ではあるが網膜の血管層をマッピングすることができる25。組織学およびマイクロコンピュータ断層撮影法(μCT)は、光学技術の高分解能を維持し、全眼血管形態に関する情報を提供する4が、どちらの技術も眼のサンプリングを必要とするため、診療所や希少種または絶滅危惧種では不可能である。これらの確立された網膜画像化技術の限界のいくつかを克服するために、ここでの研究は、胚および心血管イメージングのために以前に説明したような類似の技術を適用することによって、眼全体にまたがる一連の等間隔の2次元超音波スキャン上で血液運動がインシリコでマッピングされる麻酔動物に関する超音波プロトコルを提示する26,2728およびOCT血管造影29。このアプローチは、造影剤を使用せずに非侵襲的な3次元深眼血管造影の生成を可能にし、種間の眼内の血流分布をマッピングするための新しい道を開く。

Protocol

以下の議定書は、デンマーク食品農業水産省、デンマーク獣医食品局(許可番号2016-15-0201-00835)内のデンマーク動物実験検査官の許可を得て実施されました。 1.麻酔および超音波媒体 研究動物を麻酔する。注:適切な麻酔の種類および用量は、種に大きく依存する。一般に、MS-222(3-アミノ安息香酸エチルメタンスルホン酸)、ベンゾカイン(4-アミノ安息香酸エチル)?…

Representative Results

眼の血管床を画像化する流れ増強超音波技術は、種の範囲に適用することができ、現在、46の異なる脊椎動物種で使用されている(図1、表1)。非成体哺乳類脊椎動物における有核赤血球の存在は、シネ記録における静的組織と比較して、流れる血液の正のコントラストを提供する(補足ファイル2)。しかし、フレームごとに分析すると、血液と周囲…

Discussion

流れ増強超音波を用いた血管画像化は、現在の技術よりもいくつかの利点を提供するが、その本質的な限界を有する眼の血管系の非侵襲的画像化のための新しい方法を提供する。流れ増強超音波の主な利点は、網膜色素上皮を超える被写界深度を有する眼血管造影を生成する能力であり、これは光学技術における被写界深度を制限する。超音波イメージングでは、空間分解能と被写界深度は?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究はカールスバーグ財団(CF17-0778;CF18-0658)、ルンドベック財団(R324-2019-1470;R346-2020-1210)、Velux Foundations(00022458)、The A.P. Møller Foundation for the Advancement of Medical Science、Marie Skłodowska-Curie助成金協定(No. 754513)に基づく欧州連合のHorizon 2020研究イノベーションプログラム、およびオーフス大学研究財団。

Materials

MS-222 Sigma E10521-50G
Benzocaine Sigma E-1501
Propofol B Braun
12260470_0320
Alfaxalon Jurox NA
Isoflurane Zoetis 50019100
Ultrasound scanner VisualSonics Vevo 2100

References

  1. Yu, C. Q., Schwab, I. R., Dubielzig, R. R. Feeding the vertebrate retina from the Cambrian to the Tertiary. Journal of Zoology. 278 (4), 259-269 (2009).
  2. Yu, D. Y., Cringle, S. J. Oxygen distribution and consumption within the retina in vascularised and avascular retinas and in animal models of retinal disease. Progress in Retinal and Eye Research. 20 (2), 175-208 (2001).
  3. Country, M. W. Retinal metabolism: A comparative look at energetics in the retina. Brain Research. 1672, 50-57 (2017).
  4. Damsgaard, C., et al. Retinal oxygen supply shaped the functional evolution of the vertebrate eye. Elife. , 8 (2019).
  5. Buttery, R. G., Hinrichsen, C. F. L., Weller, W. L., Haight, J. R. How thick should a retina be? A comparative study of mammalian species with and without intraretinal vasculature. Vision Research. 31 (2), 169-187 (1991).
  6. Ames, A., Li, Y., Heher, E., Kimble, C. Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na+ transport. The Journal of Neuroscience. 12 (3), 840-853 (1992).
  7. Chase, J. The Evolution of retinal vascularization in mammals: A comparison of vascular and avascular retinae. Ophthalmology. 89 (12), 1518-1525 (1982).
  8. Johnson, G. L. Ophthalmoscopic studies on the eyes of mammals. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 254 (794), 207-220 (1968).
  9. Johnson, G. L. I. Contributions to the comparative anatomy of the mammalian eye, chiefly based on ophthalmoscopic examination. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 194 (194-206), 1-82 (1901).
  10. Rodriguez-Ramos Fernandez, J., Dubielzig, R. R. Ocular comparative anatomy of the family Rodentia. Veterinary Ophthalmology. 16, 94-99 (2013).
  11. Copeland, D. E. Functional vascularization of the teleost eye. Current Topics in Eye Research. 3, 219-280 (1980).
  12. Meyer, D. B., Crescitelli, F. . The Visual System in Vertebrates. Handbook of Sensory Physiology. 7, (1977).
  13. Potier, S., Mitkus, M., Kelber, A. Visual adaptations of diurnal and nocturnal raptors. Seminars in Cell & Developmental Biology. 106, 116-126 (2020).
  14. Wittenberg, J. B., Wittenberg, B. A. Active secretion of oxygen into the eye of fish. Nature. 194, 106-107 (1962).
  15. Damsgaard, C. Physiology and evolution of oxygen secreting mechanism in the fisheye. Comparative Biochemistry and Physiology. 252, 110840 (2021).
  16. Damsgaard, C., et al. A novel acidification mechanism for greatly enhanced oxygen supply to the fish retina. Elife. 9, (2020).
  17. Wittenberg, J. B., Haedrich, R. L. The choroid rete mirabile of the fish eye. II. Distribution and relation to the pseudobranch and to the swimbladder rete mirabile. Biological Bulletin. 146 (1), 137-156 (1974).
  18. Wittenberg, J. B., Wittenberg, B. A. The choroid rete mirabile of the fish eye. I. Oxygen secretion and structure: comparison with the swimbladder rete mirabile. Biological Bulletin. 146 (1), 116-136 (1974).
  19. Berenbrink, M. Historical reconstructions of evolving physiological complexity: O2 secretion in the eye and swimbladder of fishes. Journal of Experimental Biology. 210, 1641-1652 (2007).
  20. Berenbrink, M., Koldkjaer, P., Kepp, O., Cossins, A. R. Evolution of oxygen secretion in fishes and the emergence of a complex physiological system. Science. 307 (5716), 1752-1757 (2005).
  21. Keane, P. A., Sadda, S. R. Retinal imaging in the twenty-first century: State of the art and future directions. Ophthalmology. 121 (12), 2489-2500 (2014).
  22. Yung, M., Klufas, M. A., Sarraf, D. Clinical applications of fundus autofluorescence in retinal disease. International Journal of Retina and Vitreous. 2 (1), 12 (2016).
  23. Ang, M., et al. Optical coherence tomography angiography: a review of current and future clinical applications. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 256 (2), 237-245 (2018).
  24. Spaide, R. F., Koizumi, H., Pozonni, M. C. Enhanced depth imaging spectral-domain optical coherence tomography. American Journal of Ophthalmology. 146 (4), 496-500 (2008).
  25. Shen, Q., et al. Magnetic resonance imaging of tissue and vascular layers in the cat retina. Journal of Magnetic Resonance Imaging. 23 (4), 465-472 (2006).
  26. Tan, G. X., Jamil, M., Tee, N. G., Zhong, L., Yap, C. H. 3D reconstruction of chick embryo vascular geometries using non-invasive high-frequency ultrasound for computational fluid dynamics studies. Annals of Biomedical Engineering. 43 (11), 2780-2793 (2015).
  27. Ho, S., Tan, G. X. Y., Foo, T. J., Phan-Thien, N., Yap, C. H. Organ dynamics and fluid dynamics of the HH25 chick embryonic cardiac ventricle as revealed by a novel 4D high-frequency ultrasound imaging technique and computational flow simulations. Annals of Biomedical Engineering. 45 (10), 2309-2323 (2017).
  28. Dittrich, A., Thygesen, M. M., Lauridsen, H. 2D and 3D echocardiography in the Axolotl (Ambystoma Mexicanum). Journal of Visualized Experiments: JoVE. (141), e57089 (2018).
  29. Jia, Y., et al. Split-spectrum amplitude-decorrelation angiography with optical coherence tomography. Optics Express. 20 (4), 4710-4725 (2012).
  30. Clarke, K. W., Trim, C. M., Trim, C. M. . Veterinary Anaesthesia E-Book. , (2013).
  31. Flecknell, P. . Laboratory Animal Anaesthesia. , (2015).
  32. West, G., Heard, D., Caulkett, N. . Zoo Animal and Wildlife Immobilization and Anesthesia. , (2014).
  33. Lauridsen, H., Hansen, K., Nørgård, M. &. #. 2. 1. 6. ;., Wang, T., Pedersen, M. From tissue to silicon to plastic: three-dimensional printing in comparative anatomy and physiology. Royal Society Open Science. 3 (3), 150643 (2016).
  34. Lauridsen, H., et al. Inside out: Modern imaging techniques to reveal animal anatomy. PLoS One. 6 (3), 17879 (2011).
  35. Ruthensteiner, B., Heß, M. Embedding 3D models of biological specimens in PDF publications. Microscopy Research and Technique. 71 (11), 778-786 (2008).
  36. Damsgaard, C., Lauridsen, H. Deep vascular imaging in the eye with flow-enhanced ultrasound. bioRxiv. , 447055 (2021).
  37. Mueller, R. L., Ryan Gregory, T., Gregory, S. M., Hsieh, A., Boore, J. L. Genome size, cell size, and the evolution of enucleated erythrocytes in attenuate salamanders. Zoology. 111 (3), 218-230 (2008).
  38. Greis, C. Quantitative evaluation of microvascular blood flow by contrast-enhanced ultrasound (CEUS). Clinical Hemorheology and Microcirculation. 49, 137-149 (2011).
  39. Urs, R., Ketterling, J. A., Tezel, G., Silverman, R. H. Contrast-enhanced plane-wave ultrasound imaging of the rat eye. Experimental Eye Research. 193, 107986 (2020).
  40. Walls, G. L. . The vertebrate eye and its adaptive radiation. , (1942).

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Damsgaard, C., Lauridsen, H. Deep Vascular Imaging in the Eye with Flow-Enhanced Ultrasound. J. Vis. Exp. (176), e62986, doi:10.3791/62986 (2021).

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