Otolog Kanın Çift Enjeksiyonu ile Masif Pontine Kanaması
Summary
Otolog kanın çift enjeksiyonu yoluyla bir sıçanda büyük bir pontin kanama modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.
Abstract
Bir sıçanda büyük bir pontin kanama modeli oluşturmak için bir protokol sağlıyoruz. Bu çalışmada yaklaşık 250 gram ağırlığında sıçanlar kullanılmıştır. Kuyruk damarından 100 mikrolitre otolog kan alındı ve ponslara stereotaksik olarak enjekte edildi. Enjeksiyon işlemi 2 adıma ayrıldı: İlk olarak, belirli bir yere 10 μL kan enjekte edildi, anteroposterior pozisyon (AP) -9.0 mm; yanal (Lat) 0 mm; dikey (Vert) -9.2 mm, ardından AP -9.0 mm’de bulunan kalıntı kanın ikinci bir enjeksiyonu; Lat 0 mm; Vert -9.0 mm, 20 dakika arayla. Nörolojik fonksiyonu değerlendirmek için denge ışın testi, uzuv yerleştirme testi ve modifiye Voestch nöroscore kullanıldı. In vivo kanama hacmini değerlendirmek için Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG) kullanıldı. Bu modelin semptomları büyük pontin kanaması olan hastalarla uyumludu.
Introduction
İntraserebral kanama inme hastalarının beşte birini oluşturur. İntraserebral kanamanın prognozu kanamanın hızına, hacmine ve konumuna bağlıdır1,2. Ön beyin kanaması ile karşılaştırıldığında, beyin sapı kanaması daha yüksek mortalite ve morbiditeye sahiptir3. Beyin sapı kanamasının yaklaşık% 40’ı ponlarda meydana gelir4. Pontin kanamasının etiyolojisi ve patofizyolojisi, ön beyin kanamasından oldukça farklı ve daha az çalışılmıştır5.
İki çeşit pontin kanaması hayvan modeli vardır. Bunlardan biri, pons 6,7,8’dekibakteriyelkollajenaz infüzyonu ile indüklenen spontan kanama modelidir. Bu modelin en büyük avantajı kanamanın kendiliğinden olmasıdır. Bununla birlikte, kollajenaz sadece küçük bir miktarda pontin kanamasına neden olabilir. Ayrıca, kollajenaz beyinde başka yaralanmalara neden olabilir. Diğer model, pons9’aotolog kanın stereotaktik enjeksiyonu ile indüklenmiştir. Bu modelin avantajı, yüksek başarı oranı ile ustalaşmanın kolay olmasıdır. Teorik olarak, araştırmacılar herhangi bir miktarda kanı midillilerin herhangi bir yerine enjekte edebilir. Bununla birlikte, iğne yolundan geri sızıntı nedeniyle, enjekte edilen hacim sınırlıdır. Son zamanlarda, çift enjeksiyon yöntemi geri sızıntıyı azaltmak için teşvik edilmiştir9. Bu yöntem, enjeksiyonlar arasında 20 dakikalık bir aralıkla iki kez otolog kan enjekte eder. Çift enjeksiyon yöntemi hafif (30 μL) ve orta (60 μL) pontin kanamasına neden olmak için uygulanır, ancak masif pontin kanamasına neden olmaz. Klinikte, prognozu zayıf olan pontin kanamalı hastaların çoğunda büyük kanama (10 mL’den fazla) vardır.
Önceki çalışmada, sıçan10’dabir pontin iskemik inme modeli oluşturmak için bir protokol sağladık. Bu çalışmada, mevcut çift enjeksiyon yöntemini değiştiriyoruz ve midillilerin iki farklı yerine 100 μL otolog kanın çift enjeksiyonu ile bir sıçanda masif pontin kanamasına neden olmak için ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu çalışmada, büyük bir pontin kanama sıçanı modeli oluşturmak için bir protokol sağladık. Bu model patofizyolojik mekanizma ve masif pontin kanaması prognozu üzerine araştırma için kullanılabilir.
Deney boyunca, sadece biri ölen 25 sıçan kullanıldı. MRI, brüt anatomi ve HE lekelemenin doğrulanması, bu yöntemin çok düşük bir ölüm oranına ve yüksek bir başarı oranına sahip olduğunu gösterdi. Masif pontin kanama modeli oluşturmak için iki sorun çözülm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Çin Ulusal Bilim Vakfı (81471181 ve 81870933) ve Guangzhou Tıp Üniversitesi (0506308) Açılış Laboratuvarı Programı tarafından Y Jiang’a, Çin Ulusal Bilim Vakfı (81701471) ve Guangzhou Belediye Sağlık Komisyonu Bilimsel Programı (20191A011083) tarafından Z Qiu’ya ve Çin Ulusal Bilim Vakfı (81501009) tarafından L Wu’ya finansal olarak desteklendi.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
