Presentato qui è un protocollo per un modello standardizzato di loop emodinamico in vitro. Questo modello consente di testare l’emocompatibilità di tubi perfusione o stent vascolari per essere conforme allo standard ISO (International Organization for Standardization) 10993-4.
In questo studio, l’emocompatibilità dei tubi con un diametro interno di 5 mm in cloruro di polivinile (PVC) e rivestiti con diversi coniugati bioattivi è stata confrontata con tubi in PVC non rivestiti, tubi di lattice e uno stent per l’applicazione intravascolare che è stato posto all’interno dei tubi in PVC. La valutazione dell’emocompatibilità è stata effettuata utilizzando un modello di loop emodinamico in vitro raccomandato dallo standard ISO 10993-4. I tubi sono stati tagliati in segmenti di lunghezza identica e chiusi per formare anelli evitando qualsiasi gap alla giunzione, quindi riempiti di sangue umano e ruotati in un bagno d’acqua a 37 °C per 3 ore. Successivamente, il sangue all’interno dei tubi è stato raccolto per l’analisi del numero di cellule del sangue intero, dell’emolisi (emoglobina plasmatica libera), del sistema di complemento (sC5b-9), del sistema di coagulazione (fibrinopeptide A) e dell’attivazione dei leucociti (elastasi polimorfonucleare, fattore di necrosi tumorale e interleuchina-6). L’attivazione delle cellule ospiti è stata determinata per l’attivazione piastrinica, lo stato di integrina leucocitaria e gli aggregati piastrinico monociti utilizzando la citometria del flusso. L’effetto della chiusura imprecisa del loop è stato esaminato con la microscopia a raggi X e la microscopia elettronica a scansione, che ha mostrato la formazione di trombo alla giunzione. I tubi in lattice hanno mostrato la più forte attivazione sia del plasma che dei componenti cellulari del sangue, indicando una scarsa emocompatibilità, seguiti dal gruppo stent e dai tubi in PVC non rivestiti. I tubi in PVC rivestito non hanno mostrato una significativa diminuzione dello stato di attivazione delle piastrine, ma hanno mostrato un aumento della cascata di complemento e coagulazione rispetto ai tubi in PVC non rivestiti. Il modello ad anello stesso non ha portato all’attivazione di cellule o fattori solubili, e il livello di emolisi era basso. Pertanto, il modello di loop emodinamico presentato in vitro evita l’eccessiva attivazione dei componenti del sangue da parte di forze meccaniche e funge da metodo per indagare le interazioni in vitro tra sangue donatore e dispositivi medici vascolari.
Il test di emocompatibilità dei dispositivi medici è un passo cruciale nello sviluppo di nuovi dispositivi come stent vascolari o tubi perfusione per l’ossigenazione extracorporea della membrana. Fino ad oggi, i modelli animali sono considerati strumenti standard per finalizzare la procedura per testare i dispositivi medici prima della sua implementazione nell’uomo. D’ora in poi, è necessario trovare modelli alternativi in vitro che aiutino ulteriormente a ridurre al minimo le indagini sugli animali. In questo studio, quindi, abbiamo esplorato un modello di loop emodinamico in vitro in miniatura. L’obiettivo di questo metodo presentato è quello di testare la compatibilità del sangue in vitro dei dispositivi medici in conformità con lo standard ISO 10993-4.
Lo standard ISO 10993-4 descrive serie standardizzate di parametri clinici da esaminare sul campione di sangue1. In breve, si tratta di trombosi (aggregazione piastrinica e conteggio), coagulazione (fibrinopeptide A, FPA), analisi ematologica (numero di globuli interi), indice di emolisi (emoglobina plasmatica libera) e sistema di complemento (complesso di complementi terminali, sC5b9). Tuttavia, ulteriori marcatori, come l’elastasi polimorfonucleare neutrofila (PMN), l’interleuchina 6 (IL-6) e il fattore di necrosi tumorale – alfa (TNF) che riflette lo stato di attivazione dei leucociti possono anche essere contabilizzati per le misurazioni. Per determinare e quantificare le proteine libere dalle cellule circolanti presenti nel plasma sanguigno, il saggio immunoassorbente enzimatico sandwich (ELISA) rappresenta un metodo convenzionale e piùaffidabile 2,3. Allo stesso modo, il fenotipo e lo stato di attivazione delle cellule ospiti (ad esempio, i leucociti) possono essere quantificati rilevando l’espressione della superficie cellulare delle molecole mediante citometria a flusso (FACS) che fornisce letture basate su sospensione a singola cellula, in cui anticorpi specifici etichettati fluorescenti si legano alle molecole di superficie cellulare mirate4. La microscopia elettronica a scansione (SEM) è anche raccomandata per determinare la formazione di trombo sul materiale testato dallo standard ISO 10993-41. Questo metodo può essere integrato con la microtomografia a raggi X (μCT), per eseguire analisi strutturali del trombo, ad esempio, il suo spessore, dimensioni e localizzazione in un’immagine renderizzata in 3D5.
La logica alla base dell’utilizzo di questo modello emodinamico in vitro è quella di migliorare le prestazioni e i dispositivi medici compatibili comprendendo le dinamiche fisiologiche di base dei componenti del sangue come le piastrine, che sono coinvolti nell’emostasi primaria o nei leucociti e la loro interazione con diversi tipi di dispositivi vascolari. Tali sistemi in vitro sono molto richiesti in quanto riducono la necessità di studi sugli animali.
Il modello di loop presentato qui soddisfa queste esigenze. Questo modello è stato descritto per la prima volta da A.B. Chandler nel 1958 per la produzione di trombi di sangue ed è, quindi, chiamato anche Chandler Loop modello6. Fino ad ora, questo modello è stato utilizzato in una serie di esperimenti e modifiche per indagare la biocompatibilità sanguigna dei dispositivimedici 7,8,9,10,11,12,13,14. È costituito da tubi polimerici, che sono in parte riempiti di sangue e modellati in anelli richiudibili. Questi anelli ruotano in un bagno d’acqua a temperatura controllata per simulare le condizioni del flusso vascolare con i suoi effetti emoreologici. Metodi alternativi come modelli azionati da pompa o modelli che utilizzano valvole a sfera meccaniche all’interno dei loop per indurre un flusso sanguigno all’interno dei tubi polimerici sono giàstati descritti 15,16. Tuttavia, il vantaggio generale del metodo qui presentato è che la forza meccanica applicata alle cellule del sangue e alle proteine è bassa, evitando l’emolisi, e non c’è contatto tra sangue e connettori, che potrebbe portare a turbolenze del flusso e attivazione dei componenti del sangue. I principali fattori di attivazione all’interno del ciclo sono il materiale di prova stesso e l’aria che è intrappolata all’interno. Ciò aiuta a ridurre al minimo le fonti di errore di misurazione e a fornire un’elevata riproducibilità, anche se l’interfaccia sangue-aria può portare alla denaturazioneproteica 17. È anche possibile studiare varietà di materiali di tubi e diametri di stent senza restrizioni di lunghezza o dimensioni, consentendo così l’uso di tubi di diversa lunghezza e diametro interno. Inoltre, sono possibili anche emocompartibilità dell’ospite sulla chiusura imprecisa del loop e sull’esposizione alla superficie del tubo non rivestito. Altre applicazioni mediche simili di questo modello di loop emodinamico in vitro è che potrebbe anche essere utilizzato per studiare le interazioni tra immunoterapia (farmaci) e componenti del sangue durante lo sviluppo preclinico o lo screening individuale della sicurezza dei farmaci prima dello studio clinico di fase I del primo nell’uomo, o per la generazione di materiale trombo che può essere utilizzato inulteriori esperimenti 18,19,20.
Questo studio descrive un protocollo dettagliato per testare le emocompatibilità dei tubi perfusione e/o degli stent. Qui, il confronto tra tubi in PVC non rivestiti e rivestiti (epPVC: rivestimento di eparina, poliPVC: rivestimento con polimero bioattivo). L’attivazione delle piastrine è stata abbassata, ma è stata riscontrata una maggiore attivazione del sistema di coagulazione (FPA) per entrambi i tubi rivestiti rispetto ai tubi non rivestiti. I tubi hepPVC qui utilizzati vengono modificati con eparina legata covalentemente per renderli tromboresitanti21 e sono già stati utilizzati in un modello ad anello per ottimizzare e caratterizzare diversi parametri22. I tubi poliPVC utilizzati in questo studio sono tubi disponibili in commercio utilizzati in contesti clinici di perfusione ematica extracorporea e sono rivestiti con un polimero eparina per ridurne la trombogenicità23. A volte, nelle applicazioni cliniche vengono utilizzati anche tubi in PVC non rivestiti. Pertanto, abbiamo incluso i tubi in lattice come gruppo di controllo positivo che ha mostrato un’eccessiva attivazione di piastrine, sistema di coagulazione e fattori solubili come IL-6, TNF e PMN elastasi. La formazione di trombo è stata notata quando è stata simulata una chiusura imprecisa del loop. Ciò ha portato all’attivazione del sistema di coagulazione e complemento, nonché di leucociti e piastrine rispetto alle condizioni di base. Inoltre, il contatto sanguigno con il materiale stent qui usato (stent nitinolo di metallo nudo, coperto con politetrafluoroetilene espanso impregnato di carbonio) ha portato a una maggiore attivazione piastrinica e leucocitaria in termini di elastasi PMN. Nel complesso, il modello presentato non ha indotto l’emolisi in nessuno dei dispositivi vascolari testati in quanto erano paragonabili alle condizioni basali o statiche, ad eccezione dei tubi di lattice, dove l’emolisi dei globuli rossi (RBC) era ovvia. Inoltre, questi tubi perfusione possono essere esaminati mediante imaging o istologia. Sebbene le valutazioni istologiche possano essere fattibili, ci siamo concentrati principalmente sull’ELISA e sulla citometria del flusso per eseguire questi esperimenti e quindi consentire la fattibilità di condurre esperimenti sulla base del modello qui presentato per molti laboratori. Pertanto, questo metodo rappresenta un metodo fattibile per testare la biocompatibilità ematica dei dispositivi medici vascolari in conformità con le raccomandazioni dello standard ISO 10993-4. Inoltre, questo metodo può essere utilizzato ogni volta che un’interazione tra sangue e materiali deve essere testata in condizioni di flusso, imitando le condizioni in vivo.
Questo studio ha dimostrato che il modello di loop emodinamico presentato in vitro offre un metodo affidabile per testare la compatibilità del sangue in vitro dei dispositivi medici in conformità con lo standard ISO 10993-4.
Le fasi critiche del protocollo includono il prelievo di sangue e il riempimento dei tubi con sangue, dove si dovrebbe evitare un vuoto eccessivo o agitazione per impedire l’attivazione dei componenti del sangue mediante la procedura di manipolazione. Inoltre, è molto importante congelare immediatamente i campioni di plasma e tenerli sul ghiaccio dopo lo scongelamento, poiché l’attivazione del complemento e del sistema di coagulazione può essere manolata mantenendo i campioni a temperatura ambiente per un tempo più lungo.
Poiché questo modello ha sia meriti che demeriti rispetto ad altri modelli in vitro, è necessario prendere in considerazione diversi fattori durante la progettazione degli esperimenti.
In primo luogo, i loop possono essere variati in lunghezza e diametro per adattarsi a varie configurazioni sperimentali. Nel caso in cui la configurazione includa tubi a contrasto di diversi diametri interni, va tenuto presente che le differenze di diametro si tradurranno in diverse forze di taglio, influenzando così la coagulazione e completando la cascata7. In secondo luogo, la velocità di rotazione è stata impostata a 30 giri/min in questo esperimento. Ciò si tradurrà in un flusso sanguigno di circa 25 cm / s, che è paragonabile alla velocità del flusso sanguigno negli innesti di bypass coronaricaumana 25. Il tasso di deformazione, generato dalla rotazione dei loop, è il parametro principale che avvierà cascate biochimiche di componenti del sangue, comprese le cellule e le proteine senza cellule. Ma poiché il sangue è un fluido non newtoniano, la velocità di deformazione sarà influenzata anche dalla curvatura del tubo, rispettivamente dalla lunghezza dei tubi chiusi agli anelli10. Ogni volta che la velocità di rotazione o la dimensione del loop viene modificata, è importante considerare che la correlazione tra velocità di deformazione e velocità di rotazione non è lineare. La correlazione tra velocità di rotazione e velocità di deformazione non è sufficientemente esaminata fino ad oggi e sono necessari ulteriori studi per studiare questi particolariparametri 10,26,27. Tuttavia, sulla base di un modello per lo strato limite laminare, il diametro del tubo dato di 5 mm e la velocità di rotazione di 25 cm/s, una stima approssimativa della sollecitazione di taglio a parete (WSS) indicherebbe valori compresi tra 2,20 e 22,00 pascal per una distanza di 1,00-0,01 mm dalla parete del tubo quando la densità sanguigna è stimata in 1060 kg*m-3 e la viscosità cinetica è impostata su 0,0025 pascal*s28,29. È interessante notare che anche un’analisi computazionale più dettagliata della dinamica del flusso nella curvatura delle arterie coronarie umane ha mostrato valori WSS che vanno da 11,33 a 16,77 pascal a parametri approssimativamente comparabili per la velocità, la densità e la viscosità del sangue30.
Oltre a questa limitazione, il modello ad anello presentato è un sistema senza pressione, che non imita i rapporti di pressione sanguigna intravascolare del sistema vascolare umano.
La prossima importante limitazione è che il sangue è a contatto con l’aria all’interno dei loop, il che porta ulteriori interferenze. Tale contatto sangue-aria è influenzato da due parametri, che includono la permeabilità del gas dei tubi e il contenimento dell’aria all’interno dei loop mentre li riempie di sangue. Ogni materiale del tubo possiede una certa permeabilità al gas che può portare a cambiamenti significativi nelle concentrazioni di gas all’interno dei tubi. Mentre alcuni autori affermano che l’effetto risultante della permeabilità al gas sull’attivazione dei componenti del sangue rimane poco chiaro31, è noto che la funzione dei coagulatori del sangue è altamente sensibile a uno spostamento del pH, che può essere causato dalla diffusione di CO2 32,33,34. Qui, abbiamo testato la biocompatibilità dei tubi perfusione del sangue in condizioni di aria interna, paragonabile agli scenari clinici di perfusione ematica extracorporea. Per i futuri miglioramenti del modello presentato, l’incubazione dell’intero modello in un incubatore di CO2 e l’esecuzione della convalida del pH nel sangue prima e dopo l’incubazione potrebbero essere utili per standardizzare ulteriormente questo modello.
Inoltre, l’interfaccia sangue-aria all’interno dei loop può portare all’attivazione di proteine plasmatiche e frazionicellulari del sangue 35,36. I dispositivi azionati da pompa a rulli senza aria all’interno dei tubi possono evitare il problema dell’interfaccia sangue-aria, ma certamente inducono danni alle cellule del sangue con livelli elevati significativi di emoglobina rispetto al modello ad anello qui presentato, e l’emoglobina nel plasma può interferire con la sensibilità degli analiti testati in ELISA16. In questo studio abbiamo dimostrato che l’effetto emolitico del modello ad anello stesso rimane minimo durante l’utilizzo di materiali biocompatibili come tubi in PVC rivestiti di eparina. Pertanto, il modello non sta causando, da un lato, danni cellulari eccessivi rispetto ai modelli azionati dalla pompa, ma dall’altro induce proteine plasmatiche a causa del contatto con l’aria nel sangue. Da notare che van Oeveren et al. Questa promettente alternativa al modello di loop qui presentato può superare il problema dell’interfaccia sangue-aria, tuttavia, rispetto al modello qui presentato, l’adesione piastrinica è ancora più alta per il modello ad anello basato sulla valvola a sfera.
Per quanto riguarda il controllo statico, è da notare che il vetro stesso si è dimostrato un potente attivatore del sistema coagulatorio37. Tuttavia, nella configurazione presentata, l’incubazione in un bicchiere di vetro (controllo statico) non ha portato a un’eccessiva attivazione delle cellule ospiti o all’attivazione del sistema coagulatorio rispetto ai livelli di base direttamente dopo il prelievo del sangue. In conclusione, potrebbe essere utile utilizzare ad esempio tubi in polipropilene, se il controllo statico mostra alti livelli di attivazione.
Indipendentemente dal fatto che si tratti di un modello basato su loop o di una pompa, questi modelli in vitro mancano completamente delle autentiche interazioni biologiche che sono principalmente fornite da un endotelio intatto, che è una superficie di contatto con il sangue ideale. La logica alla base di questo problema è più evidente quando si sta testando un dispositivo medico come uno stent, che potrebbe impartire risultati diversi, in termini di attivazione e proteine plasmatiche, durante la sua interazione con i componenti del sangue in presenza di endotelio. Ciò si dichiara uno dei principali inconvenienti di tutti i sistemi in vitro discussi che imitano il sistema circolatorio. Quindi, per superare questo problema, i nuovi sistemi microfluidici completamente coperti di endotelio stanno guadagnando immenso interesse, ma tuttavia rispetto al modello ad anello qui presentato, sono ancora limitati ad accogliere volumi di sangue più piccoli e portate minime38,39
Pertanto, concludiamo che il modello Chandler Loop rimane quello di essere un modello robusto per condurre test standardizzati sulla biocompatibilità del sangue dei dispositivi medici vascolari nel campo della ricerca cardiovascolare.
The authors have nothing to disclose.
Gli autori sono grati alla signora Elena Denks per la sua assistenza tecnica.
5 ml tube, K3 EDTA | Sarstedt | 32332 | |
Anti-Mouse Ig, κ/Negative Control Compensation Particles Set | Becton Dickinson BioSciences | 552843 | |
APC anti-human CD45 Antibody | BioLegend | 368512 | |
BD LSR Fortessa II cell analyzer | Becton Dickinson | 647465 | |
BD Vacutainer Citrate Tubes | Becton Dickinson | 369714 | |
BD Vacutainer one-use holder | Becton Dickinson | 364815 | |
BD Vacutainer Safety-Lok butterfly canula 21 G | Becton Dickinson | 367282 | |
Beaker glass ROTILABO short 10 ml | Carl Roth GmbH + Co. KG | X686.1 | |
Beaker glass ROTILABO short 50 ml | Carl Roth GmbH + Co. KG | X688.1 | |
Brilliant Violet 421 anti-human CD162 Antibody | BioLegend | 328808 | |
Brilliant Violet 421 anti-human CD41 Antibody | BioLegend | 303730 | |
Centrifuge ROTINA 420 | 420 R | Hettich Zentrifugen | 4701 | 4706 | |
Centrifuge tubes, 50 ml | Greiner Bio-One GmbH | 227261 | |
CHC Super modified, 5mm PVC tubing | Corline Sweden | 1807-148 | Referred to as hepPVC tube |
Circular Precision Cutter | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 007-20 | |
Closing Unit (complete with tension bands) | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 008-20 | |
Electric tape Scotch Super 33+ | VWR | MMMA331933 | |
ELISA MAX Deluxe Set Human IL-6 | BioLegend | 430504 | |
ELISA MAX Deluxe Set Human TNF-a | BioLegend | 430204 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,1 – 2,5 µL, gray | Eppendorf AG | 3123000012 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 0,5 – 10 µL, gray | Eppendorf AG | 3123000020 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 10 – 100 µL, yellow | Eppendorf AG | 3123000047 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 100 – 1,000 µL, blue | Eppendorf AG | 3123000063 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. box, 20 – 200 µL, yellow | Eppendorf AG | 3123000055 | |
Eppendorf Pipette Research plus, single channel, inkl. epT.I.P.S. sample bag, 0,5 – 5 mL, violet | Eppendorf AG | 3123000071 | |
Ethylenediaminetetraacetic acid solution | Sigma-Aldrich | 03690-100ML | |
FACS tubes polystyrene 5.0 ml round bottom | Corning BV | 352052 | |
Fetal bovine serum Gold Plus | Bio-Sell | FBS.GP.0500 | |
FITC anti-human CD14 Antibody | BioLegend | 367116 | |
Fluency plus stent 13.5 x 60 mm | Angiomed GmbH & Co | FVM14060 | |
Free Hemoglobin fHb Reagent | Bioanalytics GmbH | 004001-0250 | |
Gibco PBS Tablets | Thermo Fisher Scientific | 18912014 | |
Gloves Vasco Nitril white L | B. Braun Deutschland GmbH & Co.KG | 9208437 | |
Gloves Vasco Nitril white M | B. Braun Deutschland GmbH & Co.KG | 9208429 | |
Glutaraldehyde 25% aequous solution | Sigma Aldrich | G6257-100ML | |
Heparin, 25.000 IE in 5 ml | Rotexmedica, Trittau, Germany | PZN 3862340 | |
Human Fibrinopeptide A (FPA) ELISA Kit | Hölzel Diagnostika | abx253234 | |
Kodan tincture forte colourless | Schülke & Mayr GmbH | 104012 | |
Latex tube, ID 5 mm | Laborhandel24 GmbH | 305 0507 | |
Loop Stand | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 009-20 | |
Medimex venous tourniquet classic | ROESER Medical GmbH | 310005 | |
Microplate reader Infinite 200 Pro M Plex | Tecan | TEC006418I | |
Microplate shaker PMS-1000i | VWR | 444-0041 | |
Nalgene Metric non-phthalate PVC tubing, ID 5 mm | VWR | NALG8703-0508 | Referred to as PVC tube |
NexTemp (Standard) Single-Use Clinical Thermometer | Medical Indicators | 2112-20 | |
Nunc MaxiSorp ELISA Plates, uncoated | BioLegend | 423501 | |
Osmium tetroxide solution | Fisher Scientific | 10256970 | |
Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS | Thermo Fisher Scientific | AAJ19943K2 | |
PE anti-human CD16Antibody | BioLegend | 302008 | |
PE anti-human CD62P (P-Selectin) Antibody | BioLegend | 304906 | |
Pipette controller, pipetus | VWR | 612-1874 | |
Pipette tips epT.I.P.S. 0.2 – 5 ml | OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH & Co. KG | 5186480 | |
Pipette tips epT.I.P.S. standard 0,1 – 10µl | Th. Geyer GmbH & Co. KG | 9409410 | |
Pipette tips epT.I.P.S. standard 2 – 200µl | Th. Geyer GmbH & Co. KG | 0030 000.870 | |
Pipette tips epT.I.P.S. standard 50 – 1000µl blue | Th. Geyer GmbH & Co. KG | 0030 000.919 | |
PMN (Neutrophil) Elastase Human ELISA Kit | Fisher Scientific | BMS269 | |
Probe stand ROTILABO combi | CARL ROTH | K082.1 | |
Rack for rotation unit (12 slots 3/8 '' with variable slot width) | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 011-20 | |
RBC Lysis Buffer (10X) | BioLegend | 420301 | |
Reagent reservoirs | VWR | 613-1184 | |
Rotation Unit | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 010-20 | |
Safe-Lock micro test tubes 0.5 ml | OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH & Co. KG | 5409320 | |
Safe-Lock micro test tubes 1.5 ml | OMNILAB-LABORZENTRUM GmbH & Co. KG | 5409331 | |
sc5b9 Human ELISA KIT | TECOmedicalGroup | A029 | |
Scalpel no 10 | Fisher Scientific | NC9999403 | |
Scanning electron microscope XL30 ESEM-FEG | Philips | n.a. | |
Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 1000 ml, GL 45 | Carl Roth GmbH + Co. KG | X715.1 | |
Screw top bottle ROTILABO Clear glass, 500 ml, GL 45 | Carl Roth GmbH + Co. KG | X714.1 | |
Semi-micro cuvette 1.6 ml | Sarstedt | 67.746 | |
Serological pipette 10.0 ml | Corning BV | 4488 | |
Serological pipette, 25.0 ml | Corning BV | 4489 | |
Serological pipette, 5.0 ml | Corning BV | 4487 | |
Silicon tube, inner diameter 8 mm, outer diameter 12 mm | VWR | BURK8803-0812 | |
Sprout mini centrifuge | Biozym | 552034 | |
Stop Solution for TMB Substrate | BioLegend | 77316 | |
Swabs, sterile | Fuhrmann GmbH | 32055 | |
Syringe, 10 ml | Becton Dickinson | 300296 | |
Temperature controlled water basin | ebo kunze industriedesign, Neuffen, Germany | CLS 020-20 | |
tert-Butanol, 99.5%, extra pure, ACROS Organics | Fisher Scientific | 10000730 | |
TMB Substrate Set | BioLegend | 421101 | |
Trillium PVC tube, 5 mm ID | Medtronic | 161100107100103 | Referred to as polyPVC tube |
Tween 20 | AppliChem | A4974,0250 | |
UV-Vis Spektrometer Lambda 2 | Perkin Elmer | 33539 | |
Vornado Mini Vortexer | Biozym | 55BV101-B-E | |
XN-3000 workstation blood analyzer | Sysmex Europe | n.a. | |
μ-CT Phoenix Nanotom S | GE Sensing & Inspection, Wunstorf, Germany | n.a. |