מוצג כאן הוא פרוטוקול לניצול הכנה לתמצית כליה קליפת הכליה ונורמליזציה חלבון מוחלט כדי להדגים את הקורלציה בין גורם הצמיחה של כלי הדם והורמון החלמיזציה בכליות היונקים.
גורם הגדילה של כלי הדם (מסייע) לשלוט באנגיוגנזה ובחדירות כלי הדם בכליה. הפרעות כליות, כגון כלייתית סוכרתית, משויכות לדיסתקנה של הכליות. הגורמים השולטים ב-, בתנאים הפיזיולוגיים בכליות, אינם מובנים היטב. הורמון מחלפף (LH), הורמון פרו-אנגיוגנטי, מסייע לווסת את הביטוי הפיזיולוגי באברי הרבייה. בהינתן כי קולטני LH נמצאים בכליה, אנחנו, במכון מחקר זיגצ’יק, שיערו כאן כי LH גם מסייע לווסת את הביטוי בכליה כמו גם. כדי לספק ראיות, כיוונו להראות כי רמות LH מסוגלים לנבא רמות של היונקים בכליה. רוב החקירות הקשורות לנושא הכרוך בכליות השתמשו ביונקים בעלי סדר נמוך יותר כמודלים (כלומר, מכרסמים וארנבים). כדי לתרגם את העבודה הזאת לגוף האנושי, הוחלט לבחון את הקשר בין המערכת הבין הגדולה לבין ה-LH לבין יונקים בעלי סדר גבוה יותר (קרי, מודלים של שור ופורצין). פרוטוקול זה משתמש בחלבון מוחלט. מקליפת הכליה המפתחות להצלחת שיטה זו כוללים רכש של כליות מחיות מטבחיים מיד לאחר המוות, כמו גם נורמליזציה של רמות אנליטה (בתמצית הכליה) על ידי חלבון מוחלט. מחקר זה ממחיש בהצלחה קשר ליניארי משמעותי בין LH ו-ובהן כליות השור ו חזירי. התוצאות מתוכונות. בשני זנים שונים המחקר מספק הוכחות תומכות כי השימוש בתמציות כליות מפרות וחזירים הם משאב מעולה, חסכוני, ושופע לחקר הפיזיולוגיה של הכליות, במיוחד עבור בחינת הקורלציה בין מנתחי ה-, והאנליטים אחרים.
גורם הצמיחה של כלי הדם a (“וכדומה”), מסייע לווסת אנגיוגנזה וחדירות כלי הדם בכליות ובאיברים אחרים1,2 (להלן, המכונה “הנקרא” מכונה “כולי”). רמות הטיפול בכליה הן תחת שליטה הומאטית. כאשר רמות הכליות מוגברות או מדוכאים, הכליה עלולה להיות תקלה. לדוגמה, בתוך 3 שבועות לאחר הלידה, עכברים עם הטרוזיזטיות מיוחדות לפיתוח של ה-“ולפתח” אנדוקיזיס וכלי-דם (כלומר, נגעים כליות הנתפסים באקלמפסיה האנושית), וכישלון כליות בשלב הסופי מתרחש בהטרוזיטים אלה בגיל 3 חודשים. Podocyte הומוזיטים מסוימים מתים מפני הידרופס ואי ספיקת כליות בתוך יום אחד של לידה3,4.
מצד שני, ביטוי יתר של כליות הכליות גורם פרוטאינוריה ו-היפרפרפיה של הכליה3,4. לדוגמה, ארנבים טרנסגניים המבטאים את התצוגה המתקדמת של התערוכה מתקדמת באמצעות שיעורי סינון מוגברים בשלבים המוקדמים של נפרופתיה, ואחריו שיעורי סינון מופחת בשלבים מאוחרים יותר3. סוכרת כליירופאתי, הגורם העיקרי של מחלת הכליה בשלב הסופי אצל מבוגרים סוכרתית, הוא מקושר באופן משמעותי עם התקנה ברמה2,5. הרבה תשומת לב שולמו לתפקיד של היפוקסיה בגרימת ביטוי ה-, בתנאים פתולוגיים5. עם זאת, הגורמים השולטים במצב הפיזיולוגי (הן בכליה והן באיברים אחרים) אינם מובנים היטב2,6. זיהוי גורמים אלה (למעט חמצן) המעורבים ברגולציה הפיזיולוגית והפתולוגית היא משימה חשובה.
הורמון מחלפף (LH), הורמון פרו-אנגיוגנטי, מסייע לווסת את הביטוי הפיזיולוגי באברי הרבייה כגון השחלה והטנות7,8. מחקרים קודמים סיפקו ראיות כי LH גם עוזר לווסת את הגוף באיברים שאינם רבייה, כגון העיניים6,9,10. קולטנים LH מצויים לשד הקליפה של הכליה11,12. של הערה, כליה תאים אפיתל הכרישים, כמו גם את הקולטן LH, אקספרס וואפ11,12,13,14. לוקחים את שני התצפיות האלה יחד, אנו שיערו כי LH גם עוזר לווסת את הביטוי והוא בכליה13,14. כדי לספק ראיות של הקשר LH/מערכת זו, הפרוטוקול המוצג שואפת להראות כי רמות LH מסוגלים לנבא רמות של הכליה. מספר רב של חקירות קודמות הקשורות בכליות השתמשו במודלים היונקים הנמוכים ביותר (כלומר, מכרסמים וארנבים)2. כדי לתרגם את העבודה הזאת לגוף האנושי, המחקר בוחן את היחסים בין ומעלה LH ביותר יונקים בסדר גבוה (כאן, שור מודלים חזירי). כדי לבצע מטרה זו, חלבון מוחלט ליפוסט היה מוכן באזור קליפת המוח של שור וכליות חזירי.
לרכישת כליות מהמטבחיים מיד לאחר מוות בעלי חיים הוא המפתח להצלחה במתודולוגיה זו. זהו היתרון העיקרי של ניצול איברים מפרות וחזירים במקום גופות אדם. בדרך כלל יש לפחות עיכוב של 12-24 h מזמן המוות עד שאיברי הגוף האנושיים מושגו. בגלל ההרכב הכימי של איברי הגוף משתנה באופן משמעותי בתוך 2 h לאחר המוות<sup …
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים לקבוצת המטבחיים (Blissfield, MI) לאספקת הכליות של השור והכיצין. לא היה צורך במימון מענק למחקר זה.
Bovine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS700951 | |
Bovine VEGF-A ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS2887434 | |
Micro BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 23235 | |
Porcine LH ELISA Kit | MyBiosource, San Diego, CA. | MBS009739 | |
Porcine VEGF-A ELISA | Ray Biotech, Norcross, GA. | ELP-VEGFA-1 | |
RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher Scientific Inc, Columbus, OH. | 89901 |