כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת ICR מוסמך (המכון לחקר הסרטן) מודל murine של זיהום מערכת העצבים המרכזית כדי להציג את ההתפתחות של נוירופתיה. ניטור ויראלי חריפה הפרעות נצאליטיות על ידי עשרות מחלה זהה יכול להתבצע על מראה דנגי וירוס המושרה נוירופתיה ב vivo.
וירוס דנגה (DENV), וירוס המועבר על-ידי היתושים המועברים על ידי יתוש, עלול לגרום למחלה חמורה הידועה בשם קדחת דנגה מדמם, אשר מאופיין על ידי סיבוכים קטלניים עקב דליפת פלזמה, מיימת, היתוך, מצוקה נשימתית, . דימום חמור וליקוי איברים כמה מקרים של זיהום DENV להציג ביטויים נוירולוגיים; עם זאת, מחקרים לא חקרו באופן נוירופתוגנזה המושרה של DENV יותר. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול להשתמש חיסוני מוסמך ICR (המכון לחקר הסרטן) העכבר לחקירת אינדוקציה של מערכת העצבים המרכזית (CN) זיהום עם DENV, ואחריו את ההתקדמות של דלקת קרום המוח נגיפי חריפה כמו מחלה.
DENV, וירוס המועברות על ידי משפחת פליורידיי , מכיל גנום ה-RNA הגיוני מקודד שלושה חלבונים מבניים נגיפי (capsid, טרום קרום, מעטפה) ו שבעה חלבונים לא מבניים ויראלי (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B , ו-NS5). ארבעת סוגי הסרווים של DENV (DENV1-4), אשר להדביק כ 390,000,000 אנשים מדי שנה, לגרום נטל גלובלי אף על פי ממשלות ביים מאמצים משמעותיים לקראת וקטור יתושים ושליטה מחלות1. כיום, חיסונים להגנה ותרופות אנטי-ויראליות טיפוליות בשלבי פיתוח ודורשות אימות לטווח ארוך יותר2. בתחום הקליני, למרות חולה דנגה עם זיהום של ה-CN הוא נדיר, זה צריך להיות בחקר נוסף כדי להבין את הגיוון של פיתוח מחלת דנגה3. יש צורך בחקירה ובאימות נוספים; בעיקר, ארגון הבריאות העולמי (אשר) כלל את המעורבות של ליקוי המוח, כגון ליקוי קוגניטיבי, עוויתות, אנצפלופתיה, ודלקת קרום המוח, בסיווג חמור דנגה3,4. בניית מודלים בעלי חיים של זיהום DENV היא הכרחית לחקר נוירופתוגנזה של זיהום DENV.
ליצירת זיהום ה-CN של DENV, מספר מחקרים ביצעו מסלולים שונים של זיהום DENV, כולל (1) גרם חיסונים של C57BL/6 עכברים שקיבלו 4 x 103 פלאק-להרכיב יחידות (pfu) של DENV3 המותאם ל5, 6, (2) הצפק פנימי של עכברים balb/c שקיבלו 7 x 104 pfu של מבחנה נוירומותאמת DENV47, (3) גרם החיסון של עכברים שוויצריים שקיבלו 1 x 105 pfu של vivo neuroadapted DENV18, ו (4) גרם ו-הצפק משותפת של עכברי מוצצים ICR שהתקבלו 1 x 106 pfu של לא מותאם DENV29. על פי ממצאי מחקרים אלה5,6,7,8,9, הזיהום denv בעכברים התוצאה שכפול נגיפי במוח, המוביל נגיפי חריפה תסמונות של דלקת קרום המוח, שינויים התנהגותיים מלווים בשיתוק איברים וחוסר יציבות, מערכת העצבים העצבית והדלקת, דליפת פלזמה כללית ומקומית באמצעות מחסום הדם-מוחי (BBB) וללא השפעה. כל התוצאות ממחקרים אלה5,6,7,8,9 הראו את היכולת של denv להדביק את המוח ואת אינדוקציה של דלקת קרום המוח הנגיפי חריפה כמו מחלה לאחר הידבקות.
בהתבסס על הממצאים הנוכחיים שלנו9,10,11,12,13,14,15, יצרנו מודל murine של זיהום denv כמו ב vivo פלטפורמה כדי לבחון את היעילות הטיפולית של סוכני ממוקדות/גורמים נגד שכפול נגיפי, כמו גם רעילות נוירו. כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול מנוצל כדי ליצור העכבר icr מוסמך החוצה כדי ללמוד זיהום של הפונקציה וכלה לפקח על פיתוח נזקי עם הרבה הקצבאות שנגרמו על ידי denv. התוצאות מציגות את ההתקדמות המשמעותית של המחלה כמו דלקת קרום המוח בעכברים נגועים DENV באופן תלוי זמן.
הזיהום denv זוהה ב-cn של מטופלים חמורים דנגה3,17, מציע את האפשרות של ביטוי של דלקת קרום המוח נגיפי חריפה התרחשה במהלך פתוגנזה דנגה. כאן, אנו מדווחים על מודל vivo murine של זיהום DENV לחקר מעורבות של התפקוד העצמי של ה-CN דנגה, במיוחד עם דגש על DENV המושרה דלקת קרום המוח ויראלי …
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה היה נתמך על ידי מענקים ממשרד המדע והטכנולוגיה (MOST107-2321-B-038-001) ואת מימון הפנים הפנימי 106TMU-CIT-01-2, טאיפיי, טייוואן.
Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI) | Gibco | 11875-085 | Diluting virus |
0.3-mL Insulin Syringe | BD Ultra-FineII | 328838 | Intracerebral and intraperitoneal injection |
Microbalance | METTLER TOLEDO's LabX | AL104 | Weight mouse |
Non-adapted DENV2 (strain PL046) | The Centers for Disease Control of Taiwan | – | Infect mouse |
Institute of Cancer Research (ICR) suckling mouse | BioLASCO Taiwan Co., Ltd | – | Our murine model |