Мы предоставляем протоколы для оценки мезенхимальных стволовых клеток, изолированных от пульпы зуба и взаимодействия клеток рака простаты на основе совместного культура прямые и косвенные методы. Состояние среды и транс ну мембраны подходят для анализа косвенных паракринными активности. Заполнение дифференциально окрашенные клетки вместе является подходящей моделью для прямого ячеек взаимодействия.
Рак как многоэтапный процесс и сложные болезни не только регулируется отдельными пролиферации и роста, но также контролируется взаимодействия среды и ячейке опухоли. Выявление рака и взаимодействия стволовых клеток, включая изменения в внеклеточных среды, физических взаимодействий и выделяется факторы, может включить обнаружение новых вариантов терапии. Мы объединяем известных совместно культуры методов для создания модель системы мезенхимальных стволовых клеток (МСК) и рак клеток взаимодействий. В текущем исследовании пульпы зуба стволовых клеток (DPSCs) и PC-3 взаимодействия клеток рака простаты были рассмотрены методы прямого и косвенного Сопредседатель культуры. Состояние среды (CM), полученные из DPSCs и 0,4 мкм размера поры мембраны транс ну были использованы для изучения паракринными активности. Совместное культуры различных типов клеток вместе была выполнена для изучения взаимодействия прямых ячеек. Результаты показали, что см возросла клеточной пролиферации и снижение апоптоза в культурах клеток рака простаты. СМ и транс ну системы повышение потенциала миграции клеток PC-3 клетки. Витражи с красители разные мембраны клетки были посеяны в те же суда культуры, и DPSCs участвовали в самоорганизации структуру с PC-3 клетки при этом условии прямого сотрудничества культуры. В целом результаты показали, что методы сотрудничества культуры могут быть полезными для рака и MSC взаимодействия как модель системы.
Мезенхимальных стволовых клеток (МСК), с возможностью дифференциации и вклад регенерации мезенхимальных тканей, таких как кость, хрящ, мышцы, связки, сухожилия и жировой, были изолированы от почти всех тканей взрослого организма1 , 2. Помимо обеспечения гомеостаза ткани, производя резидентов клетки в случае хронического воспаления или травмы, они производят жизненно цитокинов и факторы роста оркестровать ангиогенеза, иммунной системы и тканей ремоделирования3. Взаимодействие MSCs с раком ткани не понятных, но накапливать данные свидетельствуют о том, что MSCs может способствовать посвящения, прогрессии и метастазированием опухоли4.
Самонаведения способность MSCs потерпевшего или хронически воспаленной области делает их ценным кандидата на основе стволовых клеток лечение. Однако рак тканей, «никогда не Исцеление ран», также релиз цитокинов, про ангиогенных молекул и жизненно важных факторов роста, которые привлекают MSCs в cancerogenous районе5. Хотя есть ограниченное отчеты, показывающие тормозящее действие MSCs на рак роста6,7, их прогрессии рака и метастазов, поощрение эффекты были широко сообщили8. MSCs, прямо или косвенно затрагивают канцерогенеза различными способами, включая подавление иммунных клеток, секретирующих факторы роста/цитокины, которые поддерживают рака пролиферации и миграции, ангиогенных активности и регулирования 9,эпителия мезенхимальных перехода (EMT)10. Опухоль среда состоит из нескольких типов клеток, включая рак связанные фибробластов (CAFs) и/или миофибробласты, эндотелиальные клетки, адипоциты и иммунные клетки11. Из них CAFs являются наиболее распространённый тип ячейки в области опухоли секретируют различные chemokines, поощрения роста и метастазирования рака8. Было показано, что производные костного MSCs могут дифференцироваться в CAFs в опухоли стромы12.
Пульпы зуба стволовых клеток (DPSCs), характеризуется как первый зубной ткани производные MSCs Gronthos и др. 13 в 2000 году и затем широко расследованы другие14,15, Экспресс плюрипотентности маркеры как Oct4, Sox2и Nanog16 и могут дифференцироваться в различные ячейки linages17. Анализ выражения генов и белков доказал, что DPSCs производить сопоставимые уровни факторов роста/цитокинов с другими MSCs Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), Ангиогенин, фактор роста фибробластов 2 (FGF2), интерлейкина-4 (Ил-4), IL-6, Ил-10, и фактор стволовых клеток (SCF), а также fms как тирозин киназы-3 лиганда (Flt – 3 Л) которые могли бы способствовать ангиогенезу, модулирует иммунные клетки и поддержки раковых клеток миграции и распространения18,19,20 . В то время как взаимодействия MSCs с раком окружающей среды были хорошо документированы в литературе, отношения между DPSCs и раковые клетки не были оценены еще. В настоящем исследовании мы создали совместно культуру и состояния средство лечения стратегий линии клетки высоко метастатического рака простаты, PC-3 и DPSCs предложить возможные действия механизма стоматологических MSCs в прогрессии рака и метастаз.
Вклад MSCs опухоли окружающей среды регулируется ряд взаимодействия включая гибридных клеток поколения через ячейку сплавливания, entosis или цитокинов и хемокиновых деятельности между стволовых клеток и клеток рака28. Структурная организация, ячеек взаимодействий и выд?…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано Университет Yeditepe. Все данные и показатели, используемые в этой статье были ранее опубликованы34.
DMEM | Invitrogen | 11885084 | For cell culture |
FBS | Invitrogen | 16000044 | For cell culture |
PSA | Lonza | 17-745E | For cell culture |
Trypsin | Invitrogen | 25200056 | For cell dissociation |
PBS | Invitrogen | 10010023 | For washes |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | Component of differentiation media |
β-Glycerophosphate | Sigma | G9422 | Component of osteogenic differentiation medium |
Ascorbic acid | Sigma | A4544 | Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium |
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS −G) | Invitrogen | 41400045 | Component of chondrogenic differentiation medium |
TGF-β | Sigma | SRP3171 | Component of chondrogenic differentiation medium |
Insulin | Sigma | I6634 | Component of adipogenic differentiation medium |
Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) | Sigma | I7018 | Component of adipogenic differentiation medium |
Indomethacin | Sigma | I7378 | Component of adipogenic differentiation medium |
MTS Reagent | Promega | G3582 | Cell viability analyses |
TUNEL Assay | Sigma | 11684795910 | Apoptotic analyses |
24-well plate inserts | Corning | 3396 | For trans-well migration assay |
PKH67 | Sigma | PKH67GL | For co-culture cell staining |
PKH26 | Sigma | PKH26GL | For co-culture cell staining |
Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | For cell fixation |
von Kossa Kit | BioOptica | 04-170801.A | For cell staining (differentiation) |
Alcian blue | Sigma | A2899 | For cell staining (differentiation) |