Summary

Cuantificación de estimulación dependiente de los anticuerpos del Virus Zika en células humanas primarias

Published: January 18, 2019
doi:

Summary

Se describe un método para evaluar el efecto de la inmunidad preexistente contra el virus del dengue en la infección del virus Zika mediante el uso de suero humano, las células humanas primarias y cuantificación de la infección por reacción en cadena cuantitativa de la polimerasa en tiempo real.

Abstract

La reciente aparición del flavivirus Zika y complicaciones neurológicas, tales como síndrome de Guillain-Barré y microcefalia en los bebés, ha llevado a preocupaciones graves de seguridad pública. Entre los factores de riesgo, estimulación dependiente de anticuerpos (ADE) representa la amenaza más significativa, como el reciente resurgimiento del virus Zika (ZIKV) es principalmente en las zonas donde la población ha estado expuesta y está en un estado de inmunidad previa a otros estrechamente relacionados flaviviruses, especialmente el virus del dengue (DENV). Aquí, describimos un protocolo para cuantificar el efecto de los anticuerpos del suero humano contra DENV en infección por ZIKV en las células humanas primarias o líneas celulares.

Introduction

Entre las enfermedades virales transmitidas por mosquitos, la infección Zika es uno de los más clínicamente importantes1. La infección es causada por un flavivirus ZIKV que, en la mayoría de los casos, Aedes aegypti el vector primario1,2. Sin embargo, hay estudios que han reportado Aedes albopictus como vector primario en algunos brotes ZIKV3. Aunque la infección es asintomática en muchos casos, los síntomas más comunes son fiebre, dolor de cabeza y musculares dolor2. No existe ninguna cura o una vacuna para la infección por ZIKV y el tratamiento disponible es principalmente de apoyo. Los brotes recientes de ZIKV en América del sur llevaron a casos severos de la enfermedad y un aumento de aproximadamente 20-fold en el trastorno del desarrollo neurológico en fetos llamado microcefalia2. Como América del sur es una zona endémica de varios arbovirus como virus DENV y del oeste del Nilo, es crucial investigar si inmunidad previa a otros flavivirus(es) desempeña un papel en la severidad de las infecciones ZIKV y enfermedad.

A lo largo de la edad, los virus han evolucionado diferentes estrategias para aumentar sus probabilidades de infectividad para apoderarse de la maquinaria de la célula huésped y suprimir la respuesta antiviral. Uno de los más fascinantes de todos es el uso de anticuerpos previamente inmune anfitrión por los virus para mejorar su replicación con el fenómeno ADE4. ADE a través de los cuatro serotipos de DENV ha sido bien estudiado y demostrado aumentar títulos virales y enfermedad resultado5,6,7. En un estudio in vitro, hemos demostrado realce significativo de replicación ZIKV debido a pre-existir inmunidad DENV en células inmunes humanas primaria8. También hemos demostrado un método in vitro pertinente para cuantificar la capacidad de mejorar la replicación ZIKV en células primarias de anticuerpos preexistente contra DENV.

El protocolo que hemos desarrollado utiliza muestras de suero humano que se prueban para la neutralización de DENV TCID 50 o análisis de la prueba de neutralización de la reducción de placa (PRNT), junto con ZIKV en células biológicamente relevantes o células derivadas de tejidos que pueden infectar ZIKV.

Protocol

Las muestras de suero utilizadas en este estudio se obtuvieron de los humanos participantes de una cohorte de Columbia. Recogida de la muestra fue aprobada por la Junta de revisión interna (IRB) en Universidad de Pamplona (Colombia, América del Sur) y Los Potios Hospital8. Las muestras se anónimamente y los investigadores no tenían acceso a información para el paciente. Se revisaron las muestras de suero para el serotipo DENV. Las muestras más fueron confirmadas para neutralizar la infecció…

Representative Results

En la figura 1, hay una ilustración diagramática paso a paso de todos los pasos necesarios para llevar a cabo el protocolo de ADE. Es un diagrama esquemático mostrando el procedimiento entero de ADE de ZIKV debido a inmunidad preexistente a DENV. La figura 2 muestra cómo humano suero muestras se categorizaron en tres grupos diferentes: muestras de la infección confirmada de DENV se refieren como el grupo de infectados con DE…

Discussion

Reactividad cruzada de anticuerpos contra DENV hacia ADE de otros serotipos DENV ha obstaculizado el desarrollo de una vacuna eficaz11. ZIKV pertenece a la misma familia, Flaviviridae y tiene una considerable homología con otros flaviviruses, especialmente DENV12. El objetivo principal de anticuerpos neutralizantes por ZIKV y DENV es la proteína, que comparte una homología de secuencia estructural y cuaternario muy alto entre los dos virus13,…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue apoyado generosamente por 1R21AI129881-01 (a Interpetative), fondos de puesta en marcha de los laboratorios nacionales de emergentes infecciosas enfermedades y la escuela de medicina de la Universidad de Boston.

Materials

Fetal Bovine Serum  GEMINI 100-106
iCycler  BioRad 785BR02188 Model No. CFX96 Optics Module
Microfuge 18 Centrifuge Beckman Coulter  367160
Nanodrop-1000 Thermoscientific  1072
Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit  Qiagen  204154 Used for 1 step RT-qPCR
RNeasy RNA Isolation Kit  Qiagen  74106 Used for RNA extraction
RPMI-medium  Gibco 11875093

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Cite This Article
Asad, S., Feitosa-Suntheimer, F., Gold, A., Londono-Renteria, B., Colpitts, T. M. Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells. J. Vis. Exp. (143), e58691, doi:10.3791/58691 (2019).

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