Pubertal 발병을 확인 하 고 쥐 및 쥐에 다 산 분석 결과 수행 하 여 생식 능력의 결정
Summary
많은 치료 및 유전자 변이 성적 성숙과 다 산의 타이밍에 영향을. 이 프로토콜 pubertal 발병 쥐 및 쥐에 성적으로 성숙한 동물 불 임 연구를 설정 하는 이전에 평가 하는 비-침략 적 방법을 설명 합니다.
Abstract
생식 능력의 평가 치료 또는 또한 불린 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 생식 축에 유전자 조작의 영향을 이해 하는 데 중요 하다. 생식 축 다 산 재생산에 유리한 조건에 적응 하는 환경 및 내부 입력의 주요 통합 이다. 쥐 및 쥐에 불 임 연구에 착수, 이전 성적 성숙 평가 제외 가능성 관찰된 생식 고기에 의해 발생 하는 지연 또는 pubertal 발병 결 석. 이 프로토콜 pubertal 발병 preputial 분리의 결정을 통해 남성 및 질 및 첫 발 정기를 통해 여성을 평가 하는 비-침략 적 접근 방식을 설명 합니다. 사춘기의 성적 성숙의 공적 및 확인 후 불 임 연구를 시작할 수 있습니다. 절차는 쥐와 쥐, 불 임 연구를 설정 하는 방법 및 어떤 매개 변수를 평가 하 고 치료 또는 유전자 삭제 다 산에의 영향을에 있는지 확인에 대 한 최적의 번 식 조건을 설명 합니다.
Introduction
사춘기를 통해 전환 성적 성숙 및 생식 능력을 달성 하기 위해 필요 합니다. Pubertal 전환 및 성인에서 비 옥의 정비 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 (그림 1) 불리는 생식 축에 의해 통제 된다. Pubertal 개시의 타이밍 및 비 옥의 정비 단단히 자손과 부모1,2의 생존의 기회를 높이기 위해 내부 뿐만 아니라 환경 요인에 의해 통제 된다. 이 프로토콜에는 생쥐와 쥐 생식 능력을 평가 하는 불 임 연구를 설정 하기 전에 성적 성숙 확인 pubertal 발병을 확인 하는 비-침략 적 접근 방식을 제공 합니다.
불 임 연구는 성적으로 성숙한 동물에서 수행 되 고 동물 사춘기를 통해 간 후에 시작 될 수 있다. Pubertal 발병 전에 생식 축, 이며 사춘기 (그림 1)를 시작에 부족 금액에 뇌 하 수 체에 성적인 성숙, 생식 샘 자극 호르몬-방출 호르몬 (GnRH)의의 핵심 드라이버 릴리스입니다. Pubertal 발병 증가 GnRH 릴리스 중간 예 하에서 발생 하는 복잡 한 프로세스입니다. GnRH 황 호르몬 (LH)과 여 포 자극 호르몬 (FSH) 분 비 뇌 하 수 체에서 2 개의 호르몬 gonadal 성숙 및 생식 기능 (그림 1)3,,45 에 대 한 필수적인 촉진 .
생식 축에 모욕 감소 다 산 되며 또한 사전 또는 지연 pubertal 발병 할 수 있다. Pubertal 발병과 생식 능력의 타이밍에 영향을 알려진 조건 포함 화학6,7, 증가/감소 몸 무게1,8에 변화를 방해 하는 내 분 비에 노출 날 길이2,9 그리고 유전자 변이10,11,12,13,,1415.
성적인 성숙의 개시 다 산 분석 결과를 설정 하기 전에 완료 해야 할 중요 한 단계 이다. Preputial 분리, 질 및 첫 발 정기를 통해 pubertal 개시 결정의 장점은 이러한 절차의 비-침략 적 특성으로 혈액 또는 동물16, 의 희생을 요구 하지 않기 17.
Pubertal 개시 결정 후 불 임 연구를 제대로 설정 생식 축의 무결성에 대 한 중요 한 정보를 제공 합니다 있으며 일반적으로 생성 하는 추가 연구 (수정)에 대 한 실험 동물의 두 번째 장점은 18.이 프로토콜에서 설명 하는 불 임 연구 설치 남성과 여성 생식 능력에서 미성년자와 주요 적자를 검색할 수 있습니다. 키 매개 변수 계산 포함 1) 첫 번째 쓰레기, 2) 주어진된 시간 프레임 및 3) 담가 크기에서 생성 하는 새끼의 수를 시간. 마지막으로, 후속 불 임 장애의 원인을 파악 하기 위해 실시 수 있는 연구의 유형에 대 한 권장 사항이 포함 되어 있습니다.
유전자 변형 쥐에 일을 반영 하는 대표적인 데이터 및 설명된 프로토콜 마우스를 말합니다. 그러나, 모든 포함된 프로토콜은 쥐에서 동등 하 게 유효 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
쥐의 전반적인 복지21성공적인 불 임 분석 결과 대 한 중요 하다. 다 산 분석 결과 수행할 때 육체적으로 확인 하는 쥐에 매일이 스트레스를 일으킬 수로 중요 하다. 이들은 스트레스도 더 자주 케이지 변경을 하지 마십시오. 이상적으로 케이지 변화는 주당 1-2 회 더 이상 해질 것 이다. 어두운 단계 빛 노출 야행성 설치류에 번 식에 부정적인 영향을 미칩니다. 어두운 시간 동안 사…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 게시의 기초는 초기 작업에 기여 하는 저자를 감사 합니다. Aitor 아구, 제네 비 브 중 라이언과 에리카 L. Schoeller 원고를 준비 하는 도움 원고와 기술 지원에 대 한 제시카 소라 리와 오스틴 턱에 감사. H.M.H. 유 니스 케네디 슈 라이버 국립 연구소의 아동 건강 및 보너스 번호 R00HD084759에서 건강의 국가 학회의 인간 발달에 의해 지원 되었다.
Materials
| Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
| Surface protector | Fisher | 1420637 | |
| Light meter | VWR | 21800-014 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
| Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
| Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
| Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
| Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
| Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
| Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scale | VWR | 10205-004 | |
| Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |
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