כאן נשתמש זוהרים, רנטגן, והדמיה פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/שחושב טומוגרפיה ללמוד איך מעכבים פעילות mTOR משפיעה על engrafted-מח עצם מיאלומה גידולים במודל xenograft. דבר זה מאפשר ניתוחים פיזיולוגית הרלוונטיים, לא פולשנית, והן עם מודאלים מרובים של מיאלומה נגד ההשפעה של טיפולים מיקוד engrafted מח עצם מיאלומה גידולים ויוו.
מיאלומה נפוצה (מ מ) גידולים engraft במח העצם (מוניטור), הישרדות והתקדמות שלהם תלויות לאינטרקציות מורכבות מולקולרית, תאית קיימים בתוך microenvironment הזה. עדיין microenvironment מוניטור לא יכול להיות בקלות משוכפל במבחנה, אשר פוטנציאל מגביל את הרלוונטיות הפיזיולוגיות של רבים במבחנה , שמחוץ ניסיוניות. נושאים אלה ניתן להתגבר על ידי ניצול מודל xenograft ב אילו לוציפראז (לוק)-תאים מ”מ 8226 transfected engraft במיוחד שלד העכבר. כאשר אלו עכברים מקבלים את המצע המתאים, D-luciferin, את ההשפעות של טיפול על הגידול והישרדות ניתן לנתח אותם על ידי מדידת שינויים של תמונות זוהרים (בלי) המיוצר על ידי גידולים בתוך vivo. נתונים אלה רבנות בלי בשילוב עם ניתוח פוזיטרונים (PET/CT) פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/חישובית באמצעות הסמן מטבולית 2-deoxy – 2 – (18F) פטור-D-גלוקוז (18F-FDG) משמש כדי לעקוב אחר השינויים בחילוף החומרים גידול לאורך זמן. פלטפורמות הדמיה אלה מאפשרים למדידות לא פולשנית מרובות בתוך microenvironment הגידול/מוניטור.
מ מ היא מחלה חשוכת מרפא של פלזמה ממאיר תאי-B לחדור ויטביע וגורמים להרס העצם, אנמיה, פגיעה כלייתית, זיהום. מ מ עד 10% – 15% של גידולים ממאירים hematological כל1 הנסיעה הוא הסרטן השכיח ביותר לערב את שלד2. הפיתוח של מ מ נובע השינוי oncogenic של תאים פלזמה מאריכים הנקבעים במרכזים נבטי של רקמות הלימפה לפני בסופו של דבר ביות מוניטור3. ויטביע מאופיין על-ידי נישות הטרוגנית מאוד; כולל רכיבים הסלולר מגוונות וקריטיים, אזורים של פו נמוך2 (היפוקסיה), vascularization נרחב, מורכבים מטריצות חוץ-תאית ציטוקין ורשתות פקטורי גדילה, אשר כולם לתרום tumorgenesis מ מ4. לפיכך, הפיתוח של מודל xenograft מ”מ המופץ מאופיין על ידי גידולים הם אך ורק engrafted ב ויטביע יהיה כלי רב עוצמה, הרלוונטית קלינית ללמוד מ מ פתולוגיה ויוו5,6. עם זאת, מכשולים טכניים רבים ניתן להגביל את האפקטיביות של רוב הדגמים xenograft, שהופך אותם יקר וקשה ליישם. זה כולל בעיות הקשורות engraftment גידול עקבי, לשחזור בתוך הגומחה מוניטור, זמן ממושך הגידול ופיתוח מגבלות ביכולת להתבונן ולמדוד ישירות שינויים של הגידול צמיחה/הישרדות ללא צורך להקריב עכברים במהלך ניסוי7,8.
פרוטוקול זה משתמש במודל xenograft ששונה בתחילה שפותח על-ידי. Miyakawa et al. 9, שבו התוצאה מהווה אתגר (IV) תוך ורידי עם תאים מיאלומה “המופץ” גידולים בעקביות ובאופן reproducibly engraft עכברים מוניטור של NOD/SCID/IL-2γ(null) (ליקר)10. הפריט החזותי בחיי עיר של גידולים אלה מושגת על ידי תרביות תאים יציב של הקו תא מ מ 8226 האנושי עם לוק אלל, באופן סדרתי מדידת השינויים רבנות בלי המיוצר על ידי אלו תאים סרטניים engrafted6. חשוב, מודל זה ניתן להרחיב לנצל שונים המבטאים לוק אנושי מ מ תא קווים אחרים (למשל, U266 ו- OPM2) עם נטייה דומה במיוחד engraft בשלד של עכברים NOG. הזיהוי של הגידולים על ידי הדמיה ביולומנאסן של העכברים לאחר מדידת ספיגת של הגששים radiopharmaceutical (כגון 18F-FDG) על ידי כן ביחד, דבר זה מאפשר אפיון נוסף של קריטי הביוכימי מסלולים (קרי, שינויים בחילוף חומרים, שינויים היפוקסיה ו של אינדוקציה של אפופטוזיס) בתוך microenvironment הגידול/מוניטור. נקודות החוזק העיקרי של מודל זה יכול להיות מודגשים בשל הזמינות של מגוון רחב של radiolabeled, זוהרים פלורסנט הגששים וסמנים שניתן ללמוד מ מ התקדמות, פתולוגיה בתוך vivo.
למרות מגוון דגמים xenograft פרה של מ מ6,9,11,12,13, היכולת ללמוד את האינטראקציות הגידול/מוניטור בתוך microenvironment מוניטור נשאר קשה 14. מהטכניקות שתוארו כאן מאפשרים engraftment מהיר ולא לשחזור 8226-לוק גידולים…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי grant1I01BX001532 VA ההצטיינות מן ארצות הברית מחלקת ותיקי לענייני ביו מעבדות מחקר ומקבל שירות פיתוח (קריינות) P.F., ולאחר E.C. תמיכה (VA המדע קליני R & D שירות . ראויות I01CX001388 פרס), שיקום VA R & D שירות (I01RX002604 פרס הצטיינות). תמיכה נוספת הגיעה מענק זרע סגל אוניברסיטת קליפורניה בלוס אנג’לס כדי J.K. תכנים אלה ואינן מייצגות בהכרח את נופי את בנו המחלקה לענייני חיילים משוחררים או הממשלה.
8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |