مثقبيه الكروزية وكيلاً لمرض شاغاس تنتج الالتهابات أعراض طويلة الأمد التي تتحول فجأة إلى الأمراض سريرياً المعترف بها. بروتوكول البحث التالية توضح دراسة المدى القصير وبائية القائم على الأسرة لكشف الكروزية ت. العدوى تنتقل جنسياً من الأصل إلى النسل.
داء المثقبيات الأمريكي ينتقل إلى البشر بالبق triatomine عن طريق ابتلاع الأغذية الملوثة، بنقل الدم أو عن طريق الخطأ في المستشفيات والمختبرات البحثية. وباﻹضافة إلى ذلك، ينتقل العدوى مثقبيه الكروزية خلقيا من أم تشاجاسيك إلى نسلها، ولكن مساهمة الشريك الذكر للتلوث داخل الرحم غير معروف. وتوحي نتائج أعشاشها وكتل من amastigotes ومن trypomastigotes في الخلايا القراب المبيض وجونيابلاستس في التجويف الخصي تنتقل العدوى الكروزية. ت. . بروتوكول البحث هنا يعرض نتائج جمهرة الدراسة الأسرة يظهر الطفيلي الحمض النووي في خلايا الدم مثنوية وحيدات النوى وفي الأمشاج فرداني من البشر. وهكذا، أكدت ثلاث عينات بيولوجية مستقلة جمعها سنة واحدة وبصرف النظر أن ت الكروزية العدوى كانت تنتقل إلى ذرية. من المثير للاهتمام، المحددة جسم الكروزية ت. كان غائبا في معظم ذرية الأسرة التي تتحمل التسامح المناعية للمستضد الطفيلي. التسامح المناعي تجلى في الدجاج الصهر إلى الكروزية ت. بعد الأسبوع الأول من النمو الجنينية والكتاكيت التي فقست من البيض تلقيح السوطيات غير قادر على إنتاج الأجسام المضادة المحددة. وعلاوة على ذلك، أنزل تقطير المني البشري إينترابيريتونيلي أو في المهبل من السذاجة الفئران أسفرت عن amastigotes الكروزية. ت. في البربخ وأنبوب سيمينيفيروس، الاسهر وأنبوب الرحم مع عدم وجود التهابات ردود الفعل في أجهزة المناعة المميز للاستنساخ. تربية الكروزية. ت.-الفئران الذكور والإناث المصابة مع الأصحاب ساذجة أدت إلى اكتساب العدوى، التي أحيلت لاحقاً إلى الذرية. وبالتالي، يعتبر برنامج قوي التعليم والمعلومات والاتصالات يشمل السكان والمنظمات الاجتماعية اللازمة لمنع مرض شاغاس.
بروتوزوا مثقبيه الكروزية تنتمي إلى عائلة تريبانوسوماتيداي يخضع لمراحل دورة الحياة تريبوماستيجوتي وأماستيجوتي في الثدييات المضيفين وموجود ابيماستيجوتيس في الحشرات ناقلات الأمراض (الرضوفي: Triatominae) القناة الهضمية وفي الثقافة أكسينيك. في العقود الأخيرة، أظهرت العديد من الدراسات وجود مرض شاغاس في البلدان في القارات الأربع تعتبر triatomine الشوائب الحرة1،2،3،،من45، 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13؛ تشتت المثقبيات الأمريكي يعزى في البداية إلى المهاجرين من أمريكا اللاتينية إلى نصف الكرة الشمالي، ولكن يمكن لم يعد رفض إمكانية أن بعض من حالات مرض شاغاس أصلي3،4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14-وقد تم المسند المصدر الذاتية يمكن التعرف عليها فقط من انتقال الكروزية. ت. نقل الأم تشاجاسيك الطفيلي إلى الذرية في حوالي 10% من حالات الحمل15؛ وظلت مساهمة الشريك الذكر بالتهابات في الرحم عن طريق السائل المنوي الدفقات غير المعترف بها.
قبل أكثر من قرن من الزمان ولاحظ المحققون16،17 داخل الخلايا الكروزية. ت. amastigotes في الخلايا القراب المبيض والجرثومية خط خلايا الخصيتين للحالات الحادة من مرض شاغاس. أعشاشها وكتل الكروزية. ت. trypomastigotes و amastigotes في خلايا القراب المبيض، وفي جونيابلاستس وفي التجويف الخصي (الشكل 1) للحالات المميتة الحاد مرض شاغاس تطوير امتياز الحصانة في أجهزة استنساخ في الغياب الالتهابات تتسرب18،19. في العقود الأخيرة، عدد قليل من الدراسات التجريبية قد أظهرت أعشاش أشكال الكروزية. ت. أماستيجوتي جولة في أنبوب سيمينيفيروس والبربخ، و الاسهر كذلك كما هو الحال في الرحم والأنابيب والمبيض خلايا القراب من الفئران المصابة حادة 120،،،من2122. وعلاوة على ذلك، من خلال دراسات الأسرة لتوثيق نقل بروتوزوا تم التحقق من الحمض النووي من مرضى داء شاغاس الأبوية لذريتهم، الحمض النووي الكروزية. ت. (ندنا) في الخلايا الجرثومية فرداني البشرية خط23، و ولوحظت في الدفقات تشاجاسيك الفئران24مراحل دورة حياة الطفيلي. هذه النتائج الاتفاق مع تقارير عن التسامح المناعي حققته الذرية الكروزية. ت.-إصابة المضيفين في حالة عدم وجود جسم محدد1،،من2526. بالإضافة إلى ذلك، التقارير الوبائية التي اقترح انتشار مرض شاغاس متوطن إلى سائر القارات3،4،5،6،7،8 ،،من910،11،،من1213 معتمدة الآن بالدراسات التجريبية التي تبين أن داء شاغاس يمكن أن تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي1 . التحقيق الحالي ويعرض على بروتوكول دراسة الوبائية أسرة ويبين أن ت الكروزية العدوى ينتشر عن طريق الاتصال الجنسي.
هنا، نحن مناقشة بروتوكول بحث القائم على الأسرة أن الإجابة على مسألة ما إذا كان مرض شاغاس البشرية ينبع من يبلغ المنقولة الكروزية ت. الالتهابات. الدراسات المبكرة يمكن أن تقدم أدلة الجنسي انتقال العدوى الكروزية. ت. ، ربما نظراً لأن البيانات المتاحة والمعلومات المتعلقة بمرض شاغاس تم…
The authors have nothing to disclose.
نحن نعترف بالمرافق المختبرية والتعليقات الانتقادية Dourado إيزابيلا، كارلا أراوخو، و “ذكي غوميز” ومساعدة تقنية من برونو دالاجو ورفائيل أندرادي. ونحن مدينون للمؤسسة للنهوض بالعلوم (فابدف)، ومجلس البحوث الوطني، ووزارة العلوم والتكنولوجيا (التكنولوجيا)، والوكالة لتدريب الموارد البشرية، وزارة التربية والتعليم (الرؤوس/لي)، البرازيل، لدعم هذه التحقيقات.
BCIP and NBT redox system | Sigma-Aldrich | 681 451 001 | |
Blood DNA Purification columns | Amersham Biosciences | 27-9603-01 | |
d-ATP, [α-32P], 250 µCi. | Perkin Elmer | BLU012H | |
DNA, Solution Salt Fish Sperm | AMRESCO | 064-10G | |
dNTP Set, 100 mM Solutions | GE Healthcare | 28-4065-51 | |
Eco RI | Invitrogen | 15202-021 | |
Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated | Southern Biotech | 2040-04 | |
Goat anti-human IgG- FITC conjugated | Biocompare | MB5198020 | |
Hybond – N+ nylon membrane | GE Healthcare | RPN303B | |
Hybridization oven | Thomas Scientific | 95-0031-02 | |
Micro imaging software cell Sens software | Olympus, Japan | ||
Molecular probes labeling System | Invitrogen | 700-0030 | |
Nsi I | Sigma-Aldrich | R5584 1KU | |
Plasmid Prep Mini Spin Kit | GE Healthcare | 28-9042-70 | |
Plate reader | Bio-Tek GmBH | 2015 | |
Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated | Sigma-Aldrich | A9171 | |
Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated | Sigma-Aldrich | F8888 | |
Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated | Sigma Aldrich | A2418 | |
Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated | Biorad | MCA5787 | |
Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine | Sigma-Aldrich | G25DNA-RO | |
Taq DNA Polymerase Recombinant | Invitrogen | 11615-010 | |
Thermal cycler system | Biorad, USA | 1709703 | |
Vector Systems | Promega | A1380 |