Hier presenteren we een protocol om te isoleren van de alvleesklier eilandjecellen muis voor het screenen van de ROS inducties door de xenobiotica teneinde de potentiële diabetogenic xenobiotische chemische stoffen.
Blootstelling aan bepaalde ecologische stoffen in mens en dier heeft gevonden om cellulaire schade van de alvleesklier β-cellen die tot de ontwikkeling van type 2 diabetes mellitus (T2DM leiden zal). Hoewel de mechanismen voor de chemische-geïnduceerde β celbeschadiging waren onduidelijk en waarschijnlijk te complex, is een terugkerende bevinding dat deze chemische stoffen veroorzaken oxidatieve stress die leidt tot de generatie van buitensporige reactieve zuurstof soorten (ROS), die het veroorzaken van schade aan de β-cel. Voor de identificatie van potentiële diabetogenic milieu chemicaliën zijn we geïsoleerd alvleesklier eilandjecellen van C57BL/6 muizen en gekweekte eilandjecellen in 96-Wells cel cultuur platen; vervolgens de eilandjecellen waren gedoseerd met chemicaliën en de ROS-generatie werd ontdekt door 2′, 7′-dichlorofluorescein (DCFH-DA) fluorescente kleurstof. Met behulp van deze methode, wij gevonden dat Bisfenol A (BPA), Benzo [a] pyreen (BaP) en polychloorbifenylen (PCB’s), kunnen induceren hoge niveaus van ROS, suggereren dat ze mogelijk schade in eilandjecellen veroorzaken. Deze methode moet zinvol zijn voor het screenen van diabetogenic xenobiotica. De gekweekte eilandjecellen kunnen daarnaast ook worden aangepast voor in vitro analyse van chemische-geïnduceerde toxiciteit in cellen van de alvleesklier.
Stijgingen in de prevalentie van T2DM zijn een wereldwijde gezondheidscrisis geworden in de afgelopen jaren, die een ernstige bedreiging voor de volksgezondheid1. Vele factoren hebben gevonden causaal verband met de ontwikkeling van T2DM, waaronder, terugkerende bevindingen suggereren dat een gemeenschappelijk convergerende punt voor deze factoren is de inductie van oxidatieve stress die tot de generatie van buitensporige ROS2 leidt , 3.
Een breed spectrum van milieu chemische stoffen zoals PCB’s, dioxinen en BaP is gebleken voor het opwekken van oxidatieve stress, die kan de functie van de alvleesklier β-cellen aantasten en leiden tot insulineresistentie en T2DM4. Hoewel het fysiologische niveau van ROS een belangrijke rol in de cellulaire functies speelt, blootstelling aan ROS die hoger is dan de capaciteit van de antioxidant-systeem resulteert in de schade aan de cellen/weefsels en leidt tot ziekten5. Cellen van de alvleesklier β express een laag niveau van anti-oxidant enzym en zijn dus een gevoelige doelgroep voor de oxidatieve stress-gemedieerde schade6,7. Chronische blootstelling aan hoge niveaus van ROS is aangetoond dat het stress-geïnduceerde alvleesklier cel dysfunctie5 veroorzaken evenals insulineresistentie in de lever en het vetweefsel8.
Het algemene doel van dit project is het ontwikkelen van een cel-gebaseerde bepaling aan scherm chemicaliën voor hun potentieel van de diabetogenic op basis van hun inductie van ROS in cellen van de alvleesklier. De alvleesklier mist metabole ontgifting en is een gevoelige doelwit voor xenobioticum veroorzaakte schade6,7. Dus, door het direct meten van de ROS gegenereerd in de cellen in de alvleesklier, deze bepaling dient een directe benadering van de chemische stof veroorzaakte schade in de alvleesklier. Ontwikkeling van deze methode, wij geïsoleerd muis alvleesklier eilandjes, gekweekt van de geïsoleerde islet onder cel cultuur voorwaarde met chemicaliën en de chemische-geïnduceerde ROS generatie als de uitlezing gebruikt. Deze procedure is eenvoudig en effectief in het identificeren van ROS-inducerende chemicaliën in het geïsoleerde rotseilandje; het kan verder worden ontwikkeld voor onderzoek van de mechanismen van toxiciteit die specifiek voor de alvleesklier in vitro zijn.
Vergaren van bewijs suggereert dat de blootstelling aan chemicaliën milieu speelt een belangrijke rol in de ontwikkeling van T2DM. Xenobiotica-geïnduceerde ROS is erkend als een potentiële etiologische factor die bijdraagt tot de ontwikkeling van T2DM. Mensen worden blootgesteld aan een breed scala van xenobiotische chemische stoffen en er is een grote behoefte aan nieuwe onderzoekstechnieken effectief de alvleesklier toxische stoffen te identificeren en te onderzoeken van het mechanisme van toxiciteit die specifiek z…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd gesteund door een subsidie van het proefproject van CREH center gesponsord door NIEHS en door nationale Natural Science Foundation of China (nr. 31572626).
10×Hank’s balanced salt solution | GIBCO | 14185-052 | |
Collagenase Type 4 | Worthington Biochemical Corporation | CLS-4 | |
polysucrose/sodium diatrizoate solution | Sigma | 10771 | |
2’,7’-dichlorofluorescein (DCFH-DA) | Sigma | D6883-50MG | |
fluorescence microplate reader | Biotek | ||
L-glutamine | Sigma | G8540-25G | |
streptomycin | GIBCO | 15140148 | |
FBS | GIBCO | 26140079 | |
RPMI 1640 | GIBCO | 11875-085 | |
avertin | Sigma | T48402-25G | |
Rat/Mouse Insulin ELISA Kit | Millipore | EZRMI-13K | |
Centrifuge | Sorval | Sorval RT7 | for 96-well plate centrifuge |
Microplate reader | Biotek | Epoch 2 | for fluorescence reading |