Dit artikel presenteert een uitgebreide procedure om te evalueren in vitro of klassieke tumor angiogenese in hemangioblastomas (HBs) en haar rol in de HBs bestaat. De resultaten wijzen op de complexiteit van de HB-neovascularization en suggereren dat deze gemeenschappelijke vorm van angiogenese slechts een aanvullende mechanisme in de HB-neovascularization is.
De inactivering van het von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor gen speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van de hemangioblastomas (HBs) binnen het menselijk zenuwstelsel (CNS). Echter zowel de cytologische oorsprong en het evolutieproces van HBs (inclusief neovascularization) blijven omstreden, en anti-angiogenese voor VHL-HBs, gebaseerd op de klassieke HB angiogenese, teleurstellende resultaten in de klinische proeven hebben opgeleverd. Een belangrijke belemmering voor de succesvolle klinische vertaling van anti-vasculaire behandeling is het ontbreken van een grondige kennis van neovascularization in deze vasculaire tumor. In dit artikel presenteren we een uitgebreide procedure om te evalueren in vitro of klassieke tumor angiogenese in HBs, evenals zijn rol in de HBs bestaat. Met deze procedure, kunnen onderzoekers nauwkeurig begrijpen de complexiteit van HB neovascularization en identificeren van de functie van deze gemeenschappelijke vorm van angiogenese in HBs. Deze protocollen kunnen worden gebruikt om de meest veelbelovende anti-vasculaire therapie voor tumoren, die hoge translationeel potentieel tumoren behandeling of heeft voor medeplichtigheid in de optimalisatie van de anti-angiogenic behandeling van HBs voortaan vertalingen evalueren. De resultaten wijzen op de complexiteit van HB neovascularization en suggereren dat dit gemeenschappelijk formulier angiogenese slechts een aanvullende mechanisme in HB neovascularization is.
Hemangioblastomas (HBs) zijn goedaardige vasculaire tumoren die uitsluitend binnen het menselijk zenuwstelsel (CNS) worden gevonden. Zij ontwikkelen bij patiënten met de ziekte van von Hippel-Lindau (VHL) of sporadische laesies. VHL-HBs zijn moeilijk te genezen door middel van de chirurgische behandeling als gevolg van de frequente herhaling en meerdere letsels die het gevolg zijn van deze genetische wanorde1. Hoewel de inactivering van het VHL tumor suppressor gen is beschouwd als de oorzaak van de tumorigenesis van VHL-HBs, blijven de cytologische oorsprong (met inbegrip van neovascularization) en het evolutieproces van HBs grotendeels controversiële2. Dus, een beter begrip van HB-neovascular biologische mechanismen kan voorzien nuttige inzichten in de strategieën van de meest veelbelovende anti-vasculaire VHL-HBs.
Recent onderzoek heeft gesuggereerd dat HB-neovascularization vergelijkbaar met de embryologic vasculogenese3,4,5 is. Klassieke vasculaire endotheliale-groeifactor (VEGF)-gemedieerde angiogenese die afkomstig is van het vasculaire endotheel en die wordt aangestuurd door VHL verlies van functie resulteerde in proliferatie en neovascular formatie, die is6uitgedaagd. In 1965, Cancilla en Zimmerman gevonden, met behulp van elektronenmicroscopie, die HBs afkomstig van het endotheel-7 zijn. Later bleek dat stromale cellen zijn afgeleid van vasoformative element8. In 1982 vonden Jurco et al. dat stromale cellen van endothelial oorsprong9. Dus veronderstelde we dat menselijke vasculaire endotheliale cellen de oorspronkelijke cellen van HB-neovascularization10 zijn. Hoewel het is beter om het gebruik van de primaire culturen uit HB-cellen afgeleid van VHL patiënten chirurgische ingrepen, onze vorige onderzoek aangegeven dat primaire culturen van HB niet stabiel zijn, en cellijnen gevestigde3niet kon worden. Bovendien, de primaire culturen in de 3D-omgeving kunnen niet identificeren de cytologische oorsprong van HB-neovascularization omdat zij de progenitoren van HB-vasculaire ingrediënten10,11 omvatten. Daarom, als een primitieve en klassieke model van endotheliale cellen, kunnen menselijke vasculaire endotheliale cellen (HUVEC) dienen als een alternatief cellulaire model voor HBs.
De gekiemde assay sferoïde is een nieuw model in weefsel engineering12,13. In deze paper, een 3D collageen gebaseerde coculture systeem in vitro met behulp van de sferoïde kiemen assay werd ontwikkeld, met een algemene doelstelling om te evalueren of klassieke tumor angiogenese in HBs, evenals zijn rol in de HBs bestaat.
Meerdere velden van vasculaire biologie onderzoek werden onlangs, gestimuleerd door de studie van de angiogenic endotheel15. In dit artikel, ontwikkelden we een endothelial sferoïde kiemen techniek als een experimenteel model om te bestuderen van de vorming van het vaartuig dat afkomstig van het VHL-gen verlies van functie in gemanipuleerde endotheliale cellen is te identificeren van nieuwe kandidaat-moleculen van de angiogenic cascade. Tot de beste van onze kennis is dit het eerste verslag het a…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd gesteund door subsidies van de Shanghai Comité van wetenschap en technologie (15411951800, 15410723200). De auteurs bedank Prof. YuMei Wen en Prof. Chao Zhao van de pathogene micro-organismen departement van Fudan Universiteit voor hun technische bijstand.
human umbilical vein endothelial cell | Fudan IBS Cell Center | FDCC-HXN180 | |
dulbecco’s modified eagle’s medium | Gibco | 11995040 | |
fetal bovine serum | Gibco | 26400044 | |
PLKO.1-puro vector | Addgene | #8453 | |
packing plasmid psPAX2 | Addgene | #12260 | |
envelope plasmid pMD2.G | Addgene | #12259 | |
3D round-bottom 96-well plates | S-Bio | MS-9096M | |
matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | reduced serum medium |
15-well plate | Ibidi | 81501 | Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight |
endothelial cell growth supplements | Sciencell | #1052 | |
10-cm culture dish | Corning | Scipu000813 | |
Puromycin | Gibco | A1113802 | |
typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
Automated Cell Counter System | BioTech | ||
Image Analysis software | Winmasis | http://mywim.wimasis.com |