逆转录病毒集成检测依赖于超 DNA 到有缺口或线性产品的转换, 作为活动的4。在细胞感染期间, 将病毒 cDNA 的两端连接到宿主染色质5。每个端接反应称为链转移。重组活性的测定可以加入两个 dna 齐聚物, 模仿病毒 cDNA 结束到目标 dna 在一致的集成反应中4,5,6,7,8。二者择一地重组在5月加入仅一个脱氧核糖核酸末端在一个非生理相关的半站点综合反应9,10。当超质粒 dna 是整合的目标时, 协同集成产品是线性化 dna 和半站点集成产品的放松圈。这些反应产物通过其相对流动性在琼脂糖凝胶电泳1。如果重组中有一个污染的核酸, 将有假放松圈或可能线性化的质粒混淆了实验结果。病毒 DNA 寡聚物可能被荧光标记, 以最终确定集成产品, 而不是核酸产品。然而, 在很大程度上有利于超的 DNA 靶点;任何超质粒通过污染核酸而导致的松弛圆或线性 DNA 的损失都可能扭曲数据11的结果和解释。因此, 在制剂中清除逆转录病毒的细菌核酸是势在必行的。
Lopez Jr., M. A., Mackler, R. M., Altman, M. P., Yoder, K. E. Detection and Removal of Nuclease Contamination During Purification of Recombinant Prototype Foamy Virus Integrase. J. Vis. Exp. (130), e56605, doi:10.3791/56605 (2017).