이 연구는 유틸리티 양적 세포 막 확장 측정 및 셀의 접착 능력의 상관 관계의 용이성을 보여 줍니다. 대표적인 예로 우리 보여 여기 그 Dickkopf 관련 단백질 3 (DKK3) 증가 lobopodia 형성을 촉진 하 고 adrenocortical 암 접착 력 셀 세포 생체 외에서.
세포 막의 확장 레 퍼 토리 그들의 접착제와 철새 잠재력을 포함 하 여 암 세포의 다양 한 악성 동작을 조절 한다. 정확 하 게 분류 셀 확장을 계량 하 고 세포의 접착 능력에 미치는 영향을 측정 하는 능력은 어떻게 셀 신호 이벤트 영향 암 세포 행동 및 공격 성을 결정 하는 중요 한. 여기, 우리가 시험관에서 설계 및 방법의 사용은 셀 확장 정량화 함께에서 설립 체 외에 모델에 접착 용량 분석 결과와 adrenocortical 암 (ACC)에 대 한 설명. 특히, 우리는 효과 DKK3의 putative 종양 억제기와 프로 차별화 요소, ACC 셀 라인, 소프트웨어-13의 막 확장 표현 형에 테스트합니다. 비교적 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 제공 하기 위해 이러한 분석을 제안 하 고 쉽게 해석할 통계를 다양 한 실험 조건에서 이러한 특성을 측정 합니다.
Dysregulated WNT 신호 adrenocortical 악성1에 중요 한 역할을 한다. 이 연구에 사용 하는 방법 조사 여부 DKK3의 입을, WNT 신호의 부정적인 레 귤 레이 터 부 신 피 질에서 dedifferentiation 이벤트 나타내고 셀 확장 레 퍼 토리 변화의 맥락에서 종양의 형성을 촉진 한다. DKK3 38 kDa 분 비는 N 맨끝 신호 펩 티 드와 당단백질 이며 그 적용된 식 세포 주기 검거 귀착되 공격적인 악성 행동을 저해 및 엽 상피 반전 이전 학문은 설명 했다 전환2.
Adrenocortical 암 (ACC) 및 다른 암 악성 동작, 부분에서 주변 표면으로 인터페이스 하는 종양 세포의 기능에 의해 영향을 포함 하 여 기질에 종양 세포 내 습을 촉진 하 고 마이그레이션3. 암 진행에 특정 세포 막 확장의 역할은 filopodia 형성을 통해 주로 다양 한 문맥에서 점점 시연 되 고. 예를 들어 L-타입 칼슘 채널의 overexpression filopodia 형성을 유도 하 여 종양 세포 침공4홍보 발견 되었습니다. 마찬가지로, Fascin, 최소한 단백질 바인딩 하는 걸 정상 조직에서 표현 이기도 overexpressed filopodia 형성5와 협회에서 암 세포에 합니다. 그러나 Lobopodia 대형 엑스트라 세포 매트릭스를 통해 효과적으로 마이그레이션할 비 악성 섬유 아 세포,, 그것은 보였다 fibrosarcoma 셀 셀 마이그레이션을 촉진 하기 위하여 lobopodia 대신 metalloproteinase 활동에 의존 하 고 침략6. 우리는 종양으로 나타났습니다 진압, Ras 연결 도메인 가족 1 isoform (RASSF1A)를 포함 하 여 및 DKK3, 함수 cytoskeletal 요소를 변경 하 고 lamellipodia 형성 증진과 침략 속성7,8방해 구를 두 다 수 있습니다.
이와 같이, 그것은 발암 및 세포 막 확장 변경, 특히 filopodia, lobopodia, 및 lamellipodia 테스트 조건 하에서 형성 평가의 관계에 관련 된 유전자의 영향을 특성에 중요 한. 현재 상태-최첨단 기술을 데이터 수집 및 해석에 대 한 점점 더 정교한 현미경 방법, 형광 라벨, 복잡 한 컴퓨터 알고리즘의 사용을 포함 합니다. 이러한 방법은 새롭고 강력한 분석 도구를 제공 하는 동안 그들의 광범위 한 사용과 세포 생물학 실험에 그들의 복잡도 제한 합니다. 또한, 정확한 정량화 및 셀 확장 형태에 변화의 관찰 아니다 일반적으로 측정된9,10. 반면, 여기 셀 확장 변경 표준 현미경 기술과 쉽게 적응할 수 있는 생체 외에서 메서드를 사용 하 여 정확 하 게 단정 하는 기술을 소개 합니다. 이러한 메서드는 또한 동시에 분석 하는 각 셀에 대 한 각 셀 확장 종류 계량 하 고 세포 막 확장 레 퍼 토리에 전반적인 변화를 결정 합니다. 우리는 또한 어떻게 이러한 변화 세포 접착 속성에 관련 된 수 보여줍니다.
실험 예를 들어, 우리는 소프트웨어-13, SW-DDK3, pCMV6-항목/DKK3 플라스 미드 벡터와 안정적으로 페 되었습니다 하 고 constitutively DKK3, 아드레날린 선에 차별화 요소를 overexpresses 지정의 이전에 만든된 셀 라인을 사용 합니다. 비 페 SW-13 셀과 남서-13 셀 안정적으로 빈 벡터 (pCMV6-항목), 소프트웨어-네오, 지정 된 페 실험 컨트롤 될 것입니다.
여기 우리는 생체 외에서 양적 방법 용이성, 몇 구 덩이-폭포, 그리고 다양 한 테스트 조건에 대 한 적용할 수 있는 안정적인 재현성 셀 확장의 특성을 설명 합니다. 또한, 간단 하 고, 정량 접착 및 운동 성 분석 실험 세포 막 확장에 관찰된 변경의 잠재적인 기능적 중요성을 상관 관계를 동시에 수행할 수 있습니다.
그러나, 이러한 방법을 몇 가지 잠재적인 제한이 발생?…
The authors have nothing to disclose.
타다 부여 재단 자금이 작품.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | ThermoFisher | 11965-092 | Supplemented with fetal bovine serum and penicllin and streptomycin |
Deulbeco's Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | 1X solution, used directly |
3.7% formaldehyde | Sigma-Aldrich | F8775 | Dilute stock solution |
0.05% crystal violet | Harleco | 192-12 | Dilute stock solution |
De-ionized water | NA | NA | NA |
Microscope with 400X magnification | NA | NA | NA |
6-well plates | Corning | 353046 | NA |
Cell dissociation solution non-enzymatic 1X | Sigma-Aldrich | C5914 | 1X solution, used directly |