Summary

Grabación de EEG en Ratas Neonatales que se mueven libremente usando un método nuevo

Published: May 29, 2017
doi:

Summary

Aquí, introducimos una técnica novedosa diseñada para registrar la electroencefalografía (EEG) en cachorros epilépticos neonatales de movimiento libre y describir sus procedimientos, características y aplicaciones. Este método permite registrar el EEG durante más de una semana.

Abstract

El EEG es un método útil para detectar la actividad eléctrica en el cerebro. Además, es una herramienta de diagnóstico ampliamente utilizada para diversas afecciones neurológicas, tales como epilepsia y trastornos neurodegenerativos. Sin embargo, técnicamente es difícil obtener registros de EEG en neonatos, ya que requiere un manejo especializado y un gran cuidado. Aquí, presentamos un nuevo método para registrar EEG en ratas neonatales (P8-P15). Diseñamos un electrodo simple y confiable usando localizadores de pin de computadora; Se puede implantar fácilmente en el cráneo de un cachorro de rata para grabar señales de EEG de alta calidad en el cerebro normal y epiléptico. Los cachorros recibieron una inyección intraperitoneal (ip) de la neurotoxina ácido cainico (KA) para inducir ataques epilépticos. La implantación quirúrgica realizada en este procedimiento es menos costosa que otros procedimientos EEG para neonatos. Este método permite registrar señales de EEG de alta calidad y estables durante más de una semana. Además, este procedimiento también se puede aplicar a adultos raSt y ratones para estudiar la epilepsia u otros trastornos neurológicos.

Introduction

Está bien establecido que la comunicación continua entre las neuronas es necesaria para obtener la función cerebral normal. La comunicación interneuronal tiene lugar principalmente en las sinapsis, donde la información de una neurona se transmite a una segunda neurona. Esta transmisión sináptica está mediada por dos tipos de estructuras estructurales dedicadas: sinapsis eléctricas o químicas 1 . La electrofisiología es el campo que capta el potencial eléctrico producido durante la comunicación interneuronal que controla las funciones corporales y el comportamiento global 2 . EEG es el método más comúnmente utilizado entre muchas técnicas electrofisiológicas.

EEG es una técnica utilizada para detectar cambios en las señales eléctricas producidas por estímulos internos o externos. Por otra parte, es una prueba esencial para el diagnóstico clínico y la predicción de los resultados de diversas afecciones neurológicas como epilepsia, Parkinson y enfermedad de AlzheimerE, así como los efectos de los agentes farmacológicos y toxicológicos 3 . Generalmente, un paciente epiléptico muestra hiperexcitabilidad y deterioro de la conectividad funcional dentro del cerebro; Estos se resumen como descargas epileptiformes interictal (IED) y pueden ser registrados por EEG en forma de picos agudos y transitorios; Olas agudas; Complejos de onda pico; O polyspikes 4 . La principal característica del cerebro epiléptico es la aparición espontánea de convulsiones epilépticas, que pueden registrarse tanto en el cuero cabelludo como en el parénquima cerebral para localizar el área cerebral responsable de las convulsiones 5 . Además, el EEG también tiene implicaciones muy importantes en trastornos neurodegenerativos como la enfermedad de Alzheimer (EA). La investigación sugiere que los registros alterados de EEG y redes oscilatorias deterioradas en pacientes con EA son comunes. Sin embargo, nuestro conocimiento sobre la patofisiología de las oscilaciones de la red en las enfermedades neurodegenerativas iEs sorprendentemente incompleta y necesita ser explorada más a fondo 6 .

En este protocolo, hemos diseñado un electrodo simple con el que se puede grabar EEG para comprender la comunicación eléctrica en el cerebro normal y el patológico. La implantación quirúrgica en este método es más barato que otros procedimientos disponibles [ 7] . Además, este método puede utilizarse para registrar señales de EEG de alta calidad y estables para períodos de tiempo más largos ( es decir, 2-4 h todos los días durante 1 semana). Además, se utilizaron electrodos más ligeros (con un peso aproximado de 26 mg) que permiten a los animales comportarse de forma más natural 8 . Este método es ampliamente aplicable al estudio de EEG en cachorros de rata neonatal que requiere el amplificador y digitalizador, comúnmente utilizado en laboratorio de electrofisiología y no requiere ningún dispositivo adicional.

Protocol

El cuidado de los animales, el procedimiento quirúrgico y los procedimientos de registro estaban de acuerdo con las directrices para el Comité de Uso y Cuidado de Animales de la Universidad Normal de China del Sur. 1. Preparación del electrodo (Figura 1A-C) NOTA: Los loci de la clavija de la computadora son simplemente un contacto de la punta como parte de la interfaz de la señal en los dispositivos de la comunicación. Se compone de un conector macho que se co…

Representative Results

Si los procedimientos quirúrgicos anteriores se llevan a cabo adecuadamente, se llevará a cabo con éxito un registro de EEG de un recién nacido de rata de rata de canal. 10 min después de la inyección de KA, un patrón regular de signos de comportamiento surgió en forma de movimientos irregulares y arañazos, temblores y pérdida de equilibrio. La Figura 2 muestra las trazas representativas del EEG bruto y las trazas expandidas ictal-tónicas e ictal-clónicas interictal. Re…

Discussion

Aquí, informamos de los procedimientos quirúrgicos y de registro para la adquisición de EEG en libre movimiento neonatal cachorros de rata por cable método ( Figura 3 ]. Se ha sugerido que el cachorro de rata P7-P12 está en la edad de desarrollo que corresponde a un recién nacido humano a término 10 , 11 . Es técnicamente difícil obtener datos de registro de EEG de alta calidad cuando se trabaja con cachorros de rata en este grupo de ed…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de China (31171355) y la Fundación de Ciencias Naturales de Guangdong (S2011010003403, 2014A030313440).

Materials

Computer pin
Pincer DELI Group Co., Ltd.
502 super glue DELI Group Co., Ltd. 7144
Drying oven Boxun GZX-9140MBE
Isofluorane RWD Life Science 902-0000-522
Stereotaxic apparatus RWD Life Science 900-0068-507
Anesthesia apparatus RWD Life Science 902-0000-510
Homeothermic Heating Device Harvard Apparatus K 024509
Amplifier Model 3000  A-M Systems 61558
Micro1401 Analog Digital converter Cambridge Electronic Design Ltd. 4383 Data acquisition unit
Spike2 Cambridge Electronic Design Ltd.

References

  1. Pereda, A. E. Electrical synapses and their functional interactions with chemical synapses. Nat Rev Neurosci. 15 (4), 250-263 (2014).
  2. Chorev, E., Epsztein, J., Houweling, A. R., Lee, A. K., Brecht, M. Electrophysiological recordings from behaving animals–going beyond spikes. Curr Opin Neurobiol. 19 (5), 513-519 (2009).
  3. Freeborn, D. L., McDaniel, K. L., Moser, V. C., Herr, D. W. Use of electroencephalography (EEG) to assess CNS changes produced by pesticides with different modes of action: effects of permethrin, deltamethrin, fipronil, imidacloprid, carbaryl, and triadimefon. Toxicol Appl Pharmacol. 282 (2), 184-194 (2015).
  4. Werhahn, K. J., Hartl, E., Hamann, K., Breimhorst, M., Noachtar, S. Latency of interictal epileptiform discharges in long-term EEG recordings in epilepsy patients. Seizure. 29, 20-25 (2015).
  5. Staba, R. J., Stead, M., Worrell, G. A. Electrophysiological biomarkers of epilepsy. Neurotherapeutics. 11 (2), 334-346 (2014).
  6. Nimmrich, V., Draguhn, A., Axmacher, N. Neuronal Network Oscillations in Neurodegenerative Diseases. Neuromolecular Med. 17 (3), 270-284 (2015).
  7. Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System. J Vis Exp. (101), e52554 (2015).
  8. Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Fisher, J. H., Ekstrand, J. J., Dudek, F. E. Recording EEG in immature rats with a novel miniature telemetry system. J Neurophysiol. 109 (3), 900-911 (2013).
  9. Dzhala, V. I., et al. NKCC1 transporter facilitates seizures in the developing brain. Nat Med. 11 (11), 1205-1213 (2005).
  10. Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr Res. 65 (1), 62-66 (2009).
  11. Savard, A., et al. Involvement of neuronal IL-1beta in acquired brain lesions in a rat model of neonatal encephalopathy. J Neuroinflammation. 10, 110 (2013).
  12. Cuaycong, M., et al. A novel approach to the study of hypoxia-ischemia-induced clinical and subclinical seizures in the neonatal rat. Dev Neurosci. 33 (3-4), 241-250 (2011).

Play Video

Cite This Article
Huo, Q., Tabassum, S., Misrani, A. A., Long, C. Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method. J. Vis. Exp. (123), e55489, doi:10.3791/55489 (2017).

View Video