A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.
סרטן לבלב נשאר אחד מסוגי הסרטן עבורו הישרדות לא השתפרה באופן משמעותי בעשורים האחרונים. רק 7% מהחולים מאובחנים ישרדו יותר מחמש שנים. על מנת להבין לחקות את המיקרו-סביבה של גידולים בלבלב, השתמשנו במודל orthotopic Murine של סרטן הלבלב, המאפשרת הדמיה לא פולשנית של התקדמות הגידול בזמן אמת. תאי סרטן לבלב לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (Panc-1 GFP) הושעו במטריצת קרום במרתף, ריכוז גבוה, (למשל, Matrigel HC) עם סרום ללא מדיה ולאחר מכן מוזרק לתוך הזנב של הלבלב באמצעות פיום בטן. השעית התא במטריצת הקרום במרתף ריכוז הגבוה הופכת חומר דמוי ג'ל ברגע שהוא מגיע לטמפרטורת חדר; ולכן, זה ג'לים כאשר הוא בא במגע עם הלבלב, יצירת חותם במקום ההזרקה ומניעת דליפת תא. צמיחת גידולים וגרורות לאיברים אחרים מנוטרים חיחיות באמצעות קרינה. זה קריטי להשתמש במסנני מתאים עירור ופליטה של GFP. הצעדים להשתלה orthotopic מפורטים במאמר זה כל כך החוקרים יכולים לשכפל את ההליך בקלות בעכברים בעירום. השלבים העיקריים של פרוטוקול זה הם הכנת תרחיף תאים, ההשתלה כירורגית, ו פלורסנט הגוף כולו בתחום ההדמיה vivo. מודל orthotopic זה נועד לחקור את היעילות של הרפוי רומן על גידולים ראשוניים גרורתי.
סרטן הלבלב מאובחן עם שכיחות מוגברת בהשוואה לסוגים אחרים של סרטן, והוא הגורם המוביל 4 th של מקרי מוות הקשורים לסרטן בארצות הברית. מרגע אבחון, מעל 90% מהחולים מתים תוך חמש שנים 1,2. נכון לעכשיו, הסרת גידול כירורגית היא התרופה היחידה לסרטן לבלב, אך פחות מ -20% מהחולים כשירים לעבור ניתוח בעיקר בגלל בעת אבחנת המחלה נמצאת בשלב מתקדם יש גרורות 3,4. היעדר סימפטומים ספציפיים עושה סרטן לבלב מחלה שקטה; חלק מהתסמינים כולל כאבי בטן, כאבי גב, חוסר תיאבון, צהבת ובחילות; אשר יכול להתפרש בקלות כמו מחלות עיכול נפוצות 4. מסיבה זו, חשוב לפתח כלים תרופתיים חדשים כדי לסייע באבחון והטיפול בסרטן לבלב.
השימוש במודלים של בעלי החיים מאפשר לנו להבין את הביולוגיה של pancreסרטן atic ומספק תובנה יישום הידע הזה לבני אדם. מודלים orthotopic xenograft של סרטן הלבלב הם מציאותיים, כי גידולים לגדול האיבר ממוצא 5. בניגוד למודלי heterotopic, שבו שורות תאים או שברי גידול הם מושתלים מתחת לעור, דוגמנות orthotopic מאפשרת הבילוי של microenvironment הגידול ומחק את האינטראקציה של תאים סרטניים עם סביבתה 6. המודל xenograft המתואר כאן נובעת גידולים משורת תאים סרטניים אנושיים הלבלב GFP Panc-1, אשר מהונדסים גנטית כדי לבטא את חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP). זיהוי GFP מאפשר עבור הדמיה לא פולשנית וניטור של גידול וגרור 7. התפתחות גידולים מתרחשת במהירות, באופן ספונטני, דומה מאוד לזה של גידולים ראשוניים של חולי סרטן לבלב אנושיים 8. מודלי Orthotopic לספק חיזוי מדויק יותר של יעילות תרופה בתגובת סוכנים טיפוליים, תוךמחקה את המיקרו-סביבה של הגידול.
כאמור, מודל זה חי מאפשר זיהוי ניאון של גידול וגרור בזמן אמת. איתור פלורסנט מאפשר הדמיה ישירה / חיות לעומת הארה. עם קרינת האור הנפלט היא תוצאה של עירור על ידי אור אחר של אורך גל קצר יותר; ואילו הארה, האור הנפלט הוא התוצאה של תגובה כימית, וייתכן שלא יהיה 9 פליטה חזקה. יתר על כן, כל הגוף הדמיה ניאון vivo אינה מזיקה החיה מאפשר לחוקרים לעקוב אחר גדילת הגידול לאורך זמן בתגובה לטיפולים.
אנו מתארים מודל בעכברים orthotopic של סרטן הלבלב המבטא GFP, ובכך מאפשר ניטור פולשני של הגידול באמצעות הגוף כולו בתחום ההדמיה ניאון vivo (איור 1). טכניקה זו מאפשרת לנו לפקח על התפתחות גידולים בזמן אמת (איור 3); זה יכול להיות כלי חשוב לחוקרים ללמוד את הי…
The authors have nothing to disclose.
We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.
RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-077 | |
Penicillin Streptomycin | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
Matrigel HC | Corning | 354248 | |
SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
Alcare or Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
TB Syringe 27G1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | ||
Surgical Scissors, 5.5"straight mayo | Henry Schein | 22-1600 | |
PANC-1 GFP cell line | Anticancer, Inc | ||
Small Animal Imaging System: | |||
iBOx Scientia, UVP : | UVP, LLC Upland, CA. | Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals |