Rapid Détection moléculaire et différenciation des virus grippaux A et B
Summary
Nous décrivons un essai rapide, à base moléculaire de la grippe A et B. L'essai détecte la grippe chaque cible dans les 15 minutes en utilisant une amplification isotherme avec des amorces spécifiques de la grippe suivie par la détection de cibles avec des sondes de balises moléculaires. Le dosage et la grippe A B est convivial et nécessaire minimes mains sur le temps d'effectuer.
Abstract
La grippe est une maladie respiratoire contagieuse provoquée par un virus de la grippe A et B chez l'homme et provoque une quantité importante de morbidité et de mortalité chaque année. La grippe A et le dosage de B a été le premier test de la grippe moléculaire rapide CLIA renoncé disponible. Le test de la grippe A et B fonctionne en utilisant une amplification isotherme avec des amorces spécifiques de la grippe suivie par la détection de cibles avec des sondes de balises moléculaires. Ici, la performance de la grippe A et le dosage de B sur congelés, archivés écouvillon nasopharyngé (NPS) spécimens stockés dans un milieu de transport viral (VTM) ont été comparés à un test de panel respiratoire.
La performance de l'essai A et B de la grippe a été évaluée en comparant les résultats de la méthode de référence du panneau respiratoire. La sensibilité pour le virus de la grippe A totale était de 67,5% (IC à 95% (CI), de 56,6 à 78,5) et la spécificité était de 86,9% (IC, 71,0 à 100). Pour les tests de virus de la grippe B, la sensibilité et la spécificité étaient de 90,2% (IC, 68,5 à 100) Et 98,8% (IC à 68,5 à 100), respectivement.
Ce système a l'avantage d'un temps d'essai significativement plus courte que tout autre test moléculaire actuellement disponibles et la procédure simple et sans pipette fonctionne sur un système entièrement intégré, fermé, à faible encombrement. Dans l'ensemble, la grippe A et le dosage de B évalué dans cette étude a le potentiel de servir de test de diagnostic rapide influenza point de soins.
Introduction
Les infections virales de la grippe se traduisent par une quantité importante de morbidité et de mortalité chaque année 1, 2, 3. La grippe Uncomplicated est caractérisée par des symptômes constitutionnels et respiratoires tels que la fièvre, des myalgies, des céphalées et une toux non productive 4, 5. Les personnes âgées, les jeunes enfants, les patients immunodéprimés et les patients atteints de comorbidités sous – jacentes sont à un risque plus élevé de complications graves telles que la pneumonie, la myocardite, une maladie du système nerveux central, ou la mort 6, 7.
L' infection grippale est unique à partir d' autres virus respiratoires en ce que l' administration rapide d' un traitement antiviral dans les 48 h de l' apparition des symptômes peut réduire la gravité de la maladie et de la longueur 8. L'identification rapide de la grippe a également étémontré pour réduire l'utilisation d'antibiotiques inutiles 9, 10. En outre, les patients hospitalisés atteints d'infections de la grippe doivent être placés dans des pièces isolées avec des précautions de contrôle des infections. Cependant, les maladies respiratoires causées par des virus non grippaux peuvent être difficiles à distinguer cliniquement de la grippe. Pour cette raison, des tests de diagnostic rapide et précis de la grippe est très importante pour la prise en charge clinique du patient.
Plusieurs essais sont disponibles pour la détection et l'identification des virus grippaux. Des tests de détection de l' antigène de la grippe rapide (RIDTs) sont largement utilisés dans la pratique clinique en tant que tests de point de soins parce qu'ils sont simples à utiliser et à fournir des résultats dans les 15 à 30 min 11, 12; cependant, leurs sensibilités varient largement (10-80%) en fonction du fabricant et de la population testée, et le type de grippe et subtyEH 13, 14, 15. Essais de fluorescence directe (DFA) fournissent des sensibilités supérieures sur RIDTs, mais le temps de traitement est supérieure (~ 3 h) et doivent être remplis par des technologues qualifiés 16, 17. Culture virale a été l'étalon-or pour le diagnostic de la grippe et a amélioré la sensibilité sur les deux RIDTs et DFA 18. Cependant, la grippe culture virale peut durer de 2 à 14 d pour terminer, en diminuant son utilité en aidant la gestion des patients 19. Enfin, des tests d'amplification des acides nucléiques (TAAN) ont remplacé les techniques de culture comme la nouvelle norme d'or dans le diagnostic de la grippe. TAAN sont considérés comme ayant la plus grande sensibilité pour la détection de la grippe en quelques heures. Cependant, TAAN sont des dosages les plus chers et nécessitent des équipements et des technologues spécialisés pour effectuer 5 <sup>, 20, 21, 22, 23, 24, 25.
La grippe A et B dosage décrit ici est le premier test moléculaire rapide grippe CLIA renoncé qui est facilement disponible. Cet essai fonctionne en utilisant une réaction d'amplification endonucléase entailler (PRES), qui utilise l'amplification isotherme avec des amorces spécifiques de la grippe suivie par la détection de cibles avec des sondes de balises moléculaires. Ce test différencie la grippe A de B, nécessite 2 min à configurer et à traiter un échantillon, et nécessite un total de 15 minutes pour terminer.
Ici, nous présentons le protocole pour le test de la grippe A & B. En outre, nous fournissons un des exemples de données mis en comparant les performances de la grippe A et le dosage de B archivé écouvillon nasopharyngé (NPS) échantillons stockés dans un milieu de transport viral (VTM) à un autre test de panel d'agents pathogènes respiratoires.
Protocol
Representative Results
Discussion
Les virus grippaux sont des causes importantes à l'échelle mondiale de morbidité et de mortalité. Un diagnostic rapide et précis de la grippe est l'une des principales clés de la gestion des éclosions de grippe pendant la saison respiratoire. D'autres tests basés sur l'antigène sont rapides et faciles à réaliser; cependant, ils ont une faible sensibilité 13. D'autre part, les tests moléculaires traditionnels ont amélioré la sensibilité, mais exigent des technol…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).
Materials
| Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
| Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
| Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
| Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
| 200 µL precision pipette | |||
| 200 µL disposable pipette tips | |||
| Viral transport medium | Remel | M4-RT |
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