Мышиные левого желудочка папиллярных мышц может быть использован для исследования сократительной способности сердца в пробирке. Эта статья подробно описывает выделение и экспериментальные протоколы для изучения сердечных характеристики сократительных.
Папиллярной мышцы изолированы от взрослых сердца мыши могут быть использованы для изучения сократительной способности сердечной мышцы во различных физиологических условиях / патологических. Сократительные характеристики могут быть оценены независимо от внешних воздействий, таких как сосудистого тонуса или нейрогуморальной статуса. Она изображает научного подхода между измерениями отдельных клеток с изолированными кардиомиоцитов и в естественных условиях исследования, как ЭхоКГ. Таким образом, препараты папиллярных мышц служить отличной моделью для изучения физиологии сердца / патофизиологии и может быть использован для исследований, таких как модуляции фармакологических агентов или разведки трансгенных животных моделях. Здесь мы опишем способ выделения мышиный левой передней папиллярной мышцы, чтобы исследовать сердечную сократимость в установке орган ванны. В отличие от препарата мышц полосы, выделенной из стенки желудочков, сосочковый мышц может быть получен в целом, не повреждая мышечную Tissuе строго. Установка орган ванна состоит из нескольких контролируемой температурой, газом и электродов, оборудованный орган ванны камер. Выделенный папиллярный мышц фиксируется в орган ванны камере и электрически стимулируется. Вызванных силы сокращений регистрируется с помощью датчика и параметры давления, например дергаться амплитуды силы и дергаться кинетика анализируются. Различные экспериментальные протоколы могут быть выполнены, чтобы исследовать кальциевые и частотно-зависимого сократимость, а также кривых доза-ответ сократительных агентов, таких как катехоламинов или других лекарственных препаратов. Кроме того, патологические состояния, такие как острой ишемии могут быть смоделированы.
Исследование белков ионных каналов, таких как относящихся свою роль в сократительной способности сердечной мышцы необходимо открыть различные pathomechanisms и установить новые терапевтические стратегии для сердечных заболеваний, таких как ишемия и сердечной недостаточности.
Сократительной функции кардиомиоцитов млекопитающих, как известно, можно модулировать с помощью различных ионных каналов, транспортеров и других белков. Действие потенциал вызвал активацию вольтзависимых сарколеммы L-типа Са 2+ каналов приводит к притоку Ca 2+ из внеклеточного пространства и впоследствии Ca 2+ -индуцированных Ca 2+ релиз (CICR) 1, который вызывает клеточный сокращение 2. Са 2+ -signaling играет центральную роль в сократительной способности сердечной мышцы и адаптации к физиологическим или патологическим стрессом. Катехоламины, включите сердечные бета-адренорецепторов, стимулируя тем самым аденилатциклазы (АЦ), который синтезирует цАМФ. Будучи активирован, PROTEIп киназы А (PKA) фосфорилирует различные внутриклеточные и мембранные белки, связанные как L-типа Ca 2+ каналов, phospholamban и рианодиновых рецепторов, в результате модификации Са 2+ и сердечной сократимости 1,3,4. цАМФ разрушается фосфодиэстеразы (ФДЭ). Активация GS-связанных, кроме бета-адренорецепторов рецепторов также приводит к накоплению цАМФ.
Методика измерений сократительной в изолированных полос желудочка мышц хорошо известна для крупных видов млекопитающих 5-8. Основываясь на возможность гена ориентации у мышей важно установить методы для анализа мышиного сердца физиологию. Тем не менее, имеющиеся данные о физиологических свойств изолированных мышечных препаратов в мышей различаются в зависимости от условий эксперимента 9-12.
Описанный метод используется для анализа сердечной сократимости левого желудочка папиллярных мышц предварительноparations в пробирке. Исследование сократительной способности сердечной мышцы осуществляется в отсутствие воздействий, модифицирующих сердечную сократимость в живом организме, как артериальное давление, нейрогуморальной стимуляции и физического или метаболического стресса. Скорость избиение подготовке контрактов мышц может быть строго определено и изменяться произвольно. Силы сокращений могут быть проанализированы в контексте конкретных стимулов, таких как кальций, концентрации бьется частоты или температуры. Кроме того, этот метод может быть использован для исследования различных компонентов сигнального пути и сравнить работу сердца генетически модифицированных мышах, управляя экспериментальные условия, упомянутые выше.
В этой рукописи мы опишем метод, чтобы расследовать сократимость мышиного папиллярной мышцы в пробирке, которые могут быть использованы, чтобы ответить на несколько научных вопросов, связанных с сердечной физиологии и патологии у мышей, а также для поддержки анализа трансгенных ?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Немецкого исследовательского (KFO 196 "Signaltransduktion бай adaptativen унд maladaptiven kardialen Перепланировка-Prozessen", FR 1638 / 1-2) и в DZHK (немецкий Центра сердечно-сосудистых исследований, часть немецких центров исследований в области здравоохранения , который является БМБФ (Федеральное министерство образования и научных исследований) инициатива).
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | S7653 | |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | P9333 | |
Glucose | Sigma-Aldrich | D9434 | |
Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
Calcium chloride dihydrate | Sigma-Aldrich | 223506 | |
Magnesium sulfate heptahydrate | Sigma-Aldrich | 230391 | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P 5655 | |
2,3-Butanedione monoxime | Sigma-Aldrich | B0753 | |
Forskolin | Sigma-Aldrich | F3917 | Hazard statement H312, solve in DMSO |
3-?Isobutyl-?1-?methylxanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | Hazard statement H 302, solve in DMSO |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
Isoprenaline hydrochloride | Sigma-Aldrich | I5627 | Hazard statement H 315-H319-H335 |
Sodium Heparine 250.000 IE/10ml | ratiopharm | PZN 3874685 | |
Histamine dihydrochloride | Sigma-Aldrich | H7250 | Hazard statement H 315-H 317-H319- H334-H335 |