جهاز بسيط للتحضير السريع الجبال الجامعة للماوس الأمعاء
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
يمكن إعداد يتصاعد كلها من الأمعاء الدقيقة والقولون الماوس للتحليل الكمي أو لاحقة تكون مضيعة للوقت وصعبا. وصفنا استخدام جهاز بسيط لخفض والأمعاء "لفة" الماوس للتحضير بشكل سريع التحضير جبل كلها ذات جودة عالية وموحدة لتلك التي يمكن تحقيقها عن طريق اليد. ويتألف الجهاز قاعدة أن يحمل 4 قضبان الفولاذ المقاوم للصدأ وأعلى، والذي يعمل دليلا القطع. يتم إدراج قضبان في تجويف الأمعاء الدقيقة [مقسمة إلى ثلثي] والقولون. ثم توضع قضبان والعينات على قطعة من الورق أو بطاقة مرشح في فتحات عقد في قاعدة الجهاز. ثم يتم وضع الجزء العلوي من الجهاز وبمثابة دليل القطع. وتستخدم الأقسام الزاوية اثنين في وسط قطعة كبار لتوجيه سكين أو مشرط وقطع الأمعاء طوليا على الجزء العلوي من قضبان. مرة واحدة وقد تم قطع الأجزاء المعوية، تتم إزالة الجزء العلوي وبطاقة، TISSرق وقضبان إزالة بلطف من الجهاز ووضعها على مقاعد البدلاء. ثم يتم إرجاع قضبان بلطف جانبية للشد وعصا شرائح المعوية على قطعة الكامن وراء ورقة أو بطاقة مرشح. ويمكن بعد ذلك فحص الإعداد النهائي أو ثابتة وتخزينها لتحليلها لاحقا. الاستعدادات لا تقدر بثمن لدراسة التغيرات المعوية في نماذج الفئران العادية أو المعدلة وراثيا. وقد استخدمت الاستعدادات لدراسة وتقدير حجم آثار التهاب (التهاب القولون)، والضرر، والآفات ما قبل السرطانية (الشاذة سرداب البؤر (ACFs) والميوسين المنضب بؤر (MDFs)) واللحمية أو الأورام.
Introduction
الماوس والماوس المعدلة وراثيا 1-3 ونموذجا لا تقدر بثمن لدراسة مختلف الأمراض وخاصة سرطان وعلاقته التهاب في الجهاز الهضمي. هذا وغالبا ما يتطلب إعداد يتصاعد كلها من الأمعاء الدقيقة و / أو القولون.
إعداد يتصاعد كلها يمكن القيام به مع زوج دقة مقص تعويض ولكن يمكن أن يستغرق حوالي 20 دقيقة في الماوس 4. هذا ليس عملي جدا للدراسات المقارنة، والتي تتطلب قدرا كبيرا من الفئران (ويقول 10 في مجموعة تخضع للتحليل الإحصائي). وبالإضافة إلى ذلك، وطول الوقت الذي يستغرقه يزيد من خطر تدهور الأنسجة. محاولة للتخفيف من حدة هذه المشكلة أدت إلى محاكمة مختلف الوسائل إعداد القطع. واستند الأول في سلسلة من لوحات معدنية، مع بساتين القطع، ولكن حجب لوحات النسيج وكان قطع وبالتالي من الصعب السيطرة عليها.
A conventionaل قلم رصاص سداسية قدمت أخيرا إلهام للجهاز القطع، ونحن يمكن بعد ذلك نرى كيف شكل نصف قلم رصاص من شأنه أن يجعل دليلا جيدا لمشرط (الشكل 1). وأدى ذلك إلى تصميم لإطار مع أربعة أدلة قطع 5. كانت فعالية هذا الجهاز دراماتيكية كما الاستعدادات في الشكل (4) تبين الفرق بين إعداد مقص وإعداد الجهاز.
شيد قمم الأجهزة الأصلية من عدة قطع من المعدن، ولكن تلك في وقت لاحق، وكان تشكيله النموذج الحالي من قطعة صلبة من الدوراليومين مزيج من ألمونيوم و نحاس. تم تشكيله على قاعدة من أعلى مستويات الجودة الراتنج عالية الكثافة.
وقد أثبت الجهاز أن تكون ذات فائدة كبيرة لإعداد يتصاعد كاملة من الماوس الأمعاء لأنها تسرع كثيرا ويحسن من جودة واتساق والاستعدادات، التي لديها مجموعة واسعة من التطبيقات.
Protocol
Representative Results
Discussion
الجهاز تسرع كثيرا من عملية بحيث يمكن للمشغلين اثنين تشريح الجثة بالكامل ماوس في غضون 6 دقائق. وسوف يشمل ذلك فحص بصري للآفات جسيمة واضحة وزنها وتحديد الأجهزة الرئيسية. وسوف تسمح أيضا للشركات لشطف، وصمة عار وتزن المعدة، الأعور والأمعاء الدقيقة والقولون واعداد يتصاعد ك…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
