Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.
인간의 염증성 장 질환 (IBD), 자신의 장점과 단점 각각의 발병 기전을 연구에 사용할 수 많은 다른 동물 모델이 있습니다. 우리는 여기에서 T 및 B 세포 결핍 마우스에게 수신자 동계 비장 CD4 + T CD45RB 높은 세포의 대체 전송에 의해 개시되는 실험적 대장염 모델을 설명한다. 나이브 크게 이펙터 세포로 구성되어 CD4 + T CD45RB 높은 세포군 밀접 인간 IBD의 주요 측면을 닮은, 만성 장염을 유도 할 수있다. 이 방법은 질병의 발병과 진행의 측면을 연구하기 위해 조작 할 수 있습니다. 또한 그것은 장내 염증 즉, 타고난, 적응의 기능 및 규제 면역 세포 인구, 환경 노출의 역할, 미생물을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 문서에서 우리는 단계별 프로토콜 대장염을 유도하는 방법을 설명한다. 이 INCludes 성공적 연구 목적 대장염이 실험 쥐 모델을 개발하기 위해 필요한 키의 기술적 측면에 비디오 데모.
The inflammatory bowel diseases (IBD) Crohn’s disease and ulcerative colitis result from an incompletely defined and complex interaction between host immune responses, genetic susceptibility, environmental factors, and the enteric luminal contents1. Recent genome-wide association studies report associations between immune cell regulatory genes and IBD susceptibility2,3. Both innate and adaptive immune cell intrinsic genes are represented in these studies, indicating a central role for these cell populations in IBD pathogenesis.
There currently exist more than 50 animal models of human IBD. While no one model perfectly phenocopies human IBD, many are useful for studying various aspects of human disease, including disease onset and progression and the wound-healing response. In the method described here, intestinal inflammation is initiated with syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cell adoptive transfer into T and B cell deficient recipient mice4. The CD4+CD45RBhigh T cell population contains mainly naïve T cells primed for activation that are capable of inducing chronic small bowel and colonic inflammation. This method allows the researcher to modify key experimental variables, including both innate and adaptive immune cell populations, to answer biologically relevant questions relating to disease pathogenesis. Additionally, this method provides precise initiation of disease onset and a well-characterized experimental time course. This permits the kinetic study of clinical features of disease progression in mice. Intestinal inflammation induced by this method shares many features with human IBD, including chronic large and small bowel transmural inflammation, pathogenesis driven by cytokines such as TNF and IL-12, and systemic symptoms such as wasting5. Thus, it is an ideal model system for studying the pathogenesis of human IBD.
The method here describes in detail the protocol for inducing experimental colitis by adoptive transfer of CD4+CD45RBhigh T cells into Rag1-/- mice. We discuss key technical steps, expected results, optimization, and trouble-shooting. We address the required elements for the successful development of this murine model of intestinal inflammation for research purposes.
여기에서 우리는 면역 결핍 쥐에 CD4 + CD45RB + T 세포의 입양 전송에 의해 쥐에서 대장 염증을 유발하는 단계별 프로토콜을 설명합니다. 받는 사람 마우스 다른 균주 있지만 (예를 들어, BALB / C, 129S6 / SvEv, 비만이 아닌 당뇨병 (NOD)) 면역 결핍과 유전 적 모델 (예를 들어, SCID, Rag2 – / – 우리는 C57BL / 6 기증자 비장과 동계 Rag1을 사용 – / -)도 4,14-16 사…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 미국 소화기 학회 (AGA) 연구 학자 상과 크론과 미국 (CCFA) (ECS에) (SZS에) 경력 개발 상, NIH NIDDK의 F30의 DK089692의 대장염 재단과 위장 생물 노스 캐롤라이나 센터의 대학에 의해 지원되었다 과 질병 부여 P30의 DK34987 (조직학 코어). UNC 유동 세포 계측법 핵심 시설은 UNC Lineberger 종합 암 센터 NCI 센터 코어 지원 그랜트 (P30CA016086)에 의해 부분적으로 지원됩니다. 우리는 조직 병리학 적 분석과 면역 조직 화학 그의 도움을 동물 용 의약품의 노스 캐롤라이나 주립 대학에서 누가 B. BORST 감사합니다.
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
10x PBS | Gibco | 14200075 | |
12x75mm round-bottom tube | Falcon | 352052 | |
15 ml conical | Corning | 430790 | |
26g x 3/8 Needle | BD Biosciences | 305110 | |
50 ml conical | Corning | 430828 | |
70 um Cell Strainer | Fisherbrand | 22363548 | |
BD IMagnet | BD Biosciences | 552311 | |
β-mercaptoethanol | Thermo Scientific | 35602 | |
CD4-FITC IgG2b | eBioscience | 11-0041 | |
CD45RB-PE IgG2a | BD Pharminogen | 553101 | |
Complete Media | RPMI-1640, 1% Pen/Strep, 10% FBS, 0.0004% β-ME | ||
FACS tube + strainer | BD Falcon | 352235 | |
Glass Microscope Slides | Fisherbrand | 12550A3 | |
Heat-inactivated FBS | Gemini | 100-106 | |
Labeling Buffer | 1x PBS, 0.5% BSA, 2 mM EDTA | ||
Lysis Buffer | 0.08% NH4Cl, 0.1% KHCO3, 1 mM EDTA | ||
MoFlo XDP | Beckman Coulter | ||
Mouse CD4 T lymphocyte Enrichment Set – DM | BD Biosciences | 558131 | |
Mouse IgG2a-PE | BD Pharminogen | 553457 | |
Mouse IgG2b-FITC | eBioscience | 11-4732 | |
Pasteur pipet | Fisherbrand | 13-678-20D | |
Penicillin-Streptomycin Solution, 100X | Corning Cellgro | 30-002-CI | |
Petri Dish | Fisherbrand | 875713 | |
Pure Ethanol 200 Proof | Decon Labs | 2705-HC | |
RPMI-1640 | Gibco | 11-875-093 | |
Syringe | BD Biosciences | 309597 | |
Trypan blue | Corning Cellgro | 25-900-CI | |
Wash Media | RPMI-1640, 1% Pen/Strep, 0.0004% β-ME |