שיטה זו פותחה במטרה לספק פתרון תרופתי קבוע באמצעות העורק הראשי, כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה של תרופות חדשניות במודלים של עכברים.
כאשר מציעים את השימוש של תרופה, שילוב תרופות, או אספקת סמים למערכת רומן, יש להעריך את הפרמקוקינטיקה של התרופה במודל המחקר. ככל שהשימוש במודלים של עכברים הוא לעתים קרובות צעד חיוני בגילוי תרופות פרה-קליני ופיתוח תרופות 1-8, יש צורך לתכנן מערכת להציג תרופות לעכברים במדים, אופן לשחזור. באופן אידיאלי, המערכת צריכה לאפשר איסוף דגימות דם במרווחים זמן קבוע על מסלול זמן מוגדר. היכולת למדוד ריכוזי תרופה על ידי ספקטרומטר מסה, אפשרה לחוקרים לעקוב אחר השינויים ברמות תרופה בפלזמה לאורך זמן בעכברים בודדים 1, 9, 10. במחקר זה, פקליטקסל הוכנס עכברים הטרנסגניים כעירוי דם מתמשך על פני שלוש שעות, ואילו דגימות דם נלקחו בו זמנית על ידי דימומי רטרו מסלולית בנקודות זמן מוגדר. חליטות עורק התרדמה הן חלופה פוטנציאלית לחליטות וריד הצוואר, כאשר גורמים כמוגידולי החלב או מכשולים אחרים לעשות חליטות הצוואר מעשיות. שימוש בטכניקה זו, ריכוזי פקליטקסל בפלזמה וברקמות השיגו רמות דומות בהשוואה לעירוי הצוואר. במדריך זה, אנו נדגים כיצד לצנתר את העורק הראשי בהצלחה על ידי הכנת קטטר מותאם למודל העכבר הבודד, ולאחר מכן להציג כיצד להוסיף ולהבטיח את הצנתר לתוך עורק הצוואר עכבר, חוט סוף הצנתר דרך חזרה צווארו של העכבר, ולחבר את העכבר למשאבה כדי לספק קצב מבוקר של זרם סמים. דימומי רטרו מסלולית נפח נמוך מרובים מאפשרים ניתוח של ריכוזי תרופה בפלזמה לאורך זמן.
עירוי תרופות דרך עורק התרדמה ניתן לבצע באופן אמין וreproducibly על ידי אופטימיזציה של ציוד וטכניקה. ההליך הוא לא מסובך, למרות שזה דורש בקרה טובה ותשומת לב לפרטים. טיפול ומיומנות מעולים יש צורך לבודד את העורק הראשי ולהכניס את הצנתר, אשר בדרך כלל ניתן לרכוש באמצעות תרגול. ניתוח על ידי טכנאי מנוסה לא יעלה על שעה אחת. לאחר ניתוח מוצלח, העכבר צריך להופיע נורמלי ובריא (אם כי העכבר עשוי להגיב לעירוי התרופה בפועל), ותרופה (ים) עשויה להיות מנוהלת במינון רציף, אחיד בשליטה. דגימות דם חייבות להילקח מאתר אחר מאשר העורק הראשי; דימומי רטרו מסלולית הוכיחו קל לאסוף ומניח את דעת לניתוח של ריכוזי תרופה.
צנתרים של גודל אופטימלי וצורה הם נכס לא יסולא בפז בביצוע עירוי מוצלח 11. מצאנו commerciall זמין הצנתריםy לעתים קרובות להיות גדול ו / או גמיש מדי כדי לאפשר גישה נוחה לעורק הראשי עכבר מדי. זה הוכיח עדיף על צנתרים אופנה מצינורות פוליאתילן המשמשים לחיבור העכבר למזרק העירוי. כך, כל צינורות, המחברים והמחטים היו בממדים עולים בקנה אחד, שפשוט הרכבה עירוי. השימוש בטכניקה זו, אין צורך לדחוף את קצה הצנתר לתוך העורק מעבר לנקודה שבה עדיין גלוי, וזרימת דם לעורק הראשי לא שוחזרה עד לאחר קטטר תחילה מאובטח. הפעולה זו מפחיתה את הסכנות של ניקוב העורק או שיש קטטר נדחפו החוצה על ידי הלחץ הגבוה של זרימת דם. עיצוב קטטר במסמך זה אינו כולל "להקפיץ" להחזיק אותו במקום, ולכן הבטחת קטטר גם עם תפרים ואספלנית היא בראש סדר עדיפויות.
חליטות עשויות להיות עדיפות על זריקות בולוס iv המשותפים, כטובות יותר חקיין של ממשל הקליני שלתרופות כגון taxanes 3, 12, 13. הטכניקה המתוארת כאן פותחו במקור כדי לאפשר לעירוי לתוך מודלים של עכברים שבי גישה לוריד הצוואר או הירך נמנעה בגלל צמיחת גידול החלב ו / או כלי דם יתר של אזור ההחדרה. שיטה זו עשויה לעתים להיות מתאימה גם בעכברים ללא גידול, למרות שבידוד וcatheterizing התרדמה הוא מעט יותר פולשנית, שמצאנו אותו עדיף על הצוואר, כי הנטייה של קיר הצוואר לקרוע הביאה הוספות וכישלונות כדי להשלים נכשלו יותר כמובן זמן 3 שעות.
בעוד שהתוצאות מופיעות כאן הן מC57BL / 6-י (ב- הוליד בית) עכברים, השתמשנו בטכניקה זו כדי להחדיר בהצלחה פקליטקסל לכמה זנים של עכברים, כוללים FVB ומעורבים-זנים, כדי לעקוב הפרמקוקינטיקה במודלים של עכברים שהופעלו transgenically ללמטה לווסת פונקציות טרנספורטר סלולריות. דגימות הדם ורקמה שנאספו הראו רמות צפויות של paclitaxאל, בטווח של הרמות שנראו לאחר חליטות הצוואר 1. טכניקה זו ניתן לצפות כי עבודה לא פחות טובה במודלים של עכברים אחרים ועם פתרונות עירוי אחרים.
עירוי בעורק התרדמה הוא טכניקה משמעותית במחקר זה של הפרמקוקינטיקה פקליטקסל. עירוי בעורק התרדמה הוא שיטה להפצה במהירות בסמים לאורך מערכת הדם 14. עירוי שעה 3 הוא קרוב יותר חקיין של ממשל הקליני של תרופות כגון taxanes מאשר זריקות בולוס. הניתוח יכול להתבצע באופן אמין על י?…
The authors have nothing to disclose.
ברצוננו להודות למתקן FCCC בעלי החיים במעבדה על תמיכתם בפרויקט זה. אנו מודים וולף מעבדות, Inc על עזרת בניתוח רמות פקליטקסל בפלזמה וברקמות. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות מעניקה K01CA120091 לEHB, וCA06927 פוקס צ'ייס במרכז הסרטן.
Table of specific reagents and equipment: | Source: | Catalog Number | Comments |
Polyethylene tubing 0.024”OD X 0.011”ID | Braintree Scientific, Inc. | PE10 | |
Stainless steel port plug (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | NB-30 | |
2 Stainless steel connector plugs (28 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | PP-28 | Slightly larger than PE tubing ID, to fit snugly and keep a tight seal. |
3 Blunted needles (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | C-30 | |
3 1cc syringes | Becton, Dickinson and Co. | 309659 | |
Sterile 0.9% Saline solution | Hospira | 0409-7984-37 | |
Cath-Loc HGS Heparin/Glycerol Solution | Braintree Scientific, Inc. | HGS | |
Silk suture | Braintree Scientific, Inc. | SUT-S 113 | |
Vanna Scissors (micro-scissors) | World Precision Instruments | 14122 | This model has a curved tip, but straight-tip scissors work as well. |
Hartman Mesquito Hemostatic Forceps | World Precision Instruments | 501705 | |
Betadine Swabsticks | Perdue Products L.P. | BSWS1S | |
Bupivacaine | Hospira | 0409-1160-01 | May be replaced with Lidocaine, or similar local anesthesia. |
Paclitaxel | LC Laboratories | P-9600 | |
Methanol | Sigma-Aldrich | 32213 | |
Micro-Hematocrit Capillary Tubes, Heparinized | Fisher Scientific | 22-362-566 | |
Capillary Tube Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
C57BL/6J mice | Fox Chase Cancer Center, Laboratory Animal Facility in-house-bred | ||
API 4000 Q-Trap mass spetrometer | Applied Biosystems |